樣本純化

精選類別
以下列舉的幾種最常見的純化技術,常被用於實驗室中,以製備供後續分析使用的樣本。
透析
透析是一种用于从样品中去除盐类或其他低分子量分子的纯化技术。它也用于交换样品的缓冲液组成。透析是一种被动式技术,需要大量缓冲液。
緩衝液置換與脫鹽
脫鹽是一種從樣品中去除鹽類及其他低分子量污染物的簡單方法。此技術亦用於不同色譜步驟前後的緩衝液交換,以及快速去除試劑以終止反應。
分級沉澱
分級沉澱用於從少量樣本中去除粗雜質。沉澱技術利用溶解度差異的原理來分離各組分。由於不同蛋白質的疏水性程度各異,提高鹽濃度可增強蛋白質之間的疏水作用,從而引發沉澱。
萃取
透過萃取進行的樣品前處理,旨在從複雜樣品或體積龐大的樣品中分離出目標分析物。 此過程可去除可能阻塞 HPLC 和 GC 色譜柱的干擾樣品成分,同時將分析物濃度提高 100 至 5,000 倍,從而顯著提升檢測靈敏度。作為選擇性與特異性樣品前處理的一部分,萃取有助於確保更可靠的精製分析。萃取類型包括液-液萃取、固相萃取 (SPE) 以及固相微萃取 (SPME)。
親和色譜
親和色譜是基於蛋白質與已結合於色譜基質上的特定配體之間之可逆相互作用,來分離蛋白質。此技術具有高度選擇性,並能實現高容量的蛋白質純化。只要針對目標蛋白質有合適的配體可用,即可採用親和色譜。
親和層析的純化過程包含捕獲與洗脫兩個步驟。在捕獲階段,目標蛋白會與固定在層析基質上的互補配體產生特異性且可逆的結合。其目的是為了分離、濃縮並穩定目標產物,同時保留其效力與活性。 在洗滌色譜介質以去除未結合物質後,透過將條件調整為有利於洗脫的狀態,即可回收已結合的目標蛋白質。洗脫可透過使用競爭性配體進行特異性洗脫,或透過改變 pH 值、離子強度或極性進行非特異性洗脫。洗脫過程使目標蛋白質得以以純化且濃縮的形式被收集。
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