qPCR

Quantitative Real-Time PCR (qPCR) using fluorescent reporter molecules to allow quantification of amplified products.與傳統 PCR 相似,DNA、cDNA 或 RNA 模板會被擴增,但在每個週期都會監測螢光信號,以進行相對或絕對定量。
這項技術適用於多個研究領域,包括基因表達分析、基因分型、microRNA 分析、遺傳變異分析和蛋白質分析。
特色類別
如何分析 qPCR 資料
測量和量化報告分子的螢光;通常這些報告分子是染料 (i. SYBR® Green、Ethidium Bromide) 或探針 (probe)。e. SYBR® Green、Ethidium Bromide),它們會在雙鏈 DNA 中的碱基間插,或者是設計用來結合特定序列的探針(i.
qPCR 數據的相對定量
qPCR 數據有兩種主要的定量方法。相對定量法是較常見的方法,它使用 ΔΔCt 資訊,藉此確定目標基因在樣本中的表達或豐度比率,與對照基因進行比較,並與參考基因的表達比率進行規範化。由於目標基因與參考基因的效率 E 值不同,因此此方法也會考慮到 E 值的差異。
qPCR 資料的絕對定量
第二種方法是絕對定量,在環境微生物學中比較常見,它使用標準曲線 (SC)。SC 方法使用已知模板濃度 N0 的稀釋系列,利用 log(N0) 對 CT(臨界週期)的線性回歸建立標準曲線。然後以此計算樣本的模板濃度。此方法的基礎是樣品的效率值與標準值相同。
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