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[首頁](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh)[應用](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/applications)[微生物測試](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/applications/microbiological-testing)無菌性測試
# 無菌性測試
無菌測試是 GMP 的關鍵要求，旨在確認藥品、醫療器材、生物製劑以及細胞與基因療法在施予患者之前，均不含活微生物。無菌測試若未通過——無論是真陽性還是假陽性結果——都將帶來嚴重後果：產品召回、患者安全風險，以及耗資巨大的監管調查。
隨著藥典標準不斷演進及監管審查日趨嚴格，現代無菌測試計畫必須應對三大相互關聯的挑戰：__方法準確性__、__資料完整性__，以及__放行速度__。對於任何遵循 GMP 運作的品質控制實驗室而言，了解現有的無菌測試方法、其監管框架，以及數位工作流程與快速微生物檢測方法的最新進展，至關重要。
從為您的產品和包裝形式選擇合適的檢測方法，到滿足監管機構在數據完整性與放行速度方面不斷演變的期望，本指南將帶您深入了解__無菌檢測的每個關鍵環節。__
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## 精選類別
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[無菌測試耗材、培養基及儀器](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/products/industrial-microbiology/sterility-testing-consumables-media-and-filtration)
用於微生物品質控制中無菌測試的實驗室儀器及耗材：無菌測試培養基、泵、硬體設備及配件。
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[熱原檢測](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/products/industrial-microbiology/pyrogen-testing)
確保安全：熱原檢測對於藥品及醫療器材至關重要。單核細胞活化試驗（MAT）可檢測內毒素及非內毒素類熱原。
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[微生物過濾](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/products/industrial-microbiology/microbial-filtration)
透過我們完整的膜過濾系統進行快速微生物檢測，加速獲得檢測結果的時間；該系統適用於生物負荷檢測、食品與飲料分析，以及大麻微生物學檢測。
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概覽
相關文章與協議
支援
## 藥品無菌檢測方法
藥品無菌檢測的藥典規範主要依據__《美國藥典》（USP）<71>__、《__歐洲藥典》__（__Ph. Eur.）2.6.1__ 及__《日本藥典》（JP）<4.06>__，其中規定樣品須於兩種不同的培養基中進行為期 __14 天的__培養。 使用兩種培養基是為了確保能全面檢測微生物：[液態硫代乙醇酸鹽培養基（FTM）](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/search/ftm-steritest?focus=products&page=1&perpage=30&sort=relevance&term=ftm%20steritest&type=product)用於厭氧菌和需氧菌（於 32.5°C 培養），以及__大豆酪蛋白水解物培養基（SCDM）__（亦稱[胰蛋白腖大豆肉湯，TSB）](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/search/tsb-steritest?focus=products&page=1&perpage=30&sort=relevance&term=tsb%20steritest&type=product)用於需氧菌和真菌（於 22.5°C 培養）。 若培養後觀察到任何混濁現象，即表示可能存在微生物污染，必須進行調查。
目前有兩種藥典認可的方法：[膜過濾法](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/technical-documents/technical-article/microbiological-testing/sterility-testing/steritest-neo-sterility-test)與[直接接種法](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/technical-documents/technical-article/microbiological-testing/sterility-testing/sterility-testing-direct-inoculation)。 方法的選擇取決於產品的性質、包裝形式及其物理化學特性。如產品性質允許，根據《美國藥典》（USP）<71>、《歐洲藥典》（Ph. Eur.）2.6.1 及《日本藥典》（JP）<4.06> 的規定，__應優先採用膜過濾法__，因其靈敏度更高且能有效去除抑制性物質。當無法進行過濾時，仍可採用直接接種法。
雖然 14 天的培養期仍是藥典標準，但基於 ATP 生物發光技術的[快速微生物檢測法（RMMs）](https://www.sigmaaldrich.com#rmms)已日益獲得監管機構認可，適用於包括細胞與基因療法在內的短保質期產品。 新的《美國藥典》（__USP）<73>__章節——「基於 ATP 生物發光技術檢測短效產品污染的微生物學方法」——為採用 RMM 以及該技術的驗證與實施提供了明確的監管框架，並將於 __2025 年 8 月__生效。
無論選用何種方法，[資料完整性](https://www.sigmaaldrich.com#data-integrity)要求均適用於所有無菌測試工作流程：從樣品接收至最終結果記錄，所有測試資料必須具備完全可追溯性、符合稽核要求，並遵循 __ALCOA++__、__21 CFR 第 11__ 部分及__歐盟附件 11__ 的規範。
## 膜過濾無菌測試
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請造訪我們的文件搜尋頁面，查閱產品資料表、認證書及技術文件。
[尋找文件](https://www.sigmaaldrich.com/documents-search)
根據__《美國藥典》（USP）<71>__、__《歐洲藥典》（Ph. Eur.）2.6.1__ 及__《日本藥典》__（__JP）<4.06>__ 的規定，膜過濾是適用於可過濾藥品__的首選監管方法__。樣本通過 0__.45 µm 的膜過濾器__，微生物被截留於過濾器中，隨後在適當的培養基中進行培養。
相較於直接接種法，此方法具有以下關鍵優勢：
- __更高靈敏度__ — 將整個樣本或複合樣本透過單一濾膜過濾
- __抑制劑去除__ — 抗菌化合物（如抗生素或防腐劑）可在培養前被沖洗掉，從而避免假陰性結果
- __封閉系統保護__ — 現代封閉式過濾裝置可確保產品在測試過程中絕不接觸外部環境，大幅降低外來污染及測試結果無效的風險
在 GMP 無菌測試環境中，無論是在層流櫃或隔離器內，使用__封閉式、一次性膜過濾裝置__均被視為最佳實務。
## 直接接種無菌性檢測
在[直接接種無菌性檢測](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/technical-documents/technical-article/microbiological-testing/sterility-testing/sterility-testing-direct-inoculation)中，會將少量樣本在無菌條件下移入適當的培養基中並進行培養。雖然此方法操作簡便，但存在若干限制，實驗室應予以考量：
- __靈敏度降低__ — 僅能接種少量樣本，從而增加漏檢低水平污染的風險
- __濁度干擾__ — 本質上呈濁或帶色產品可能在目視檢查時掩蓋微生物的生長
- __抗菌抑制作用__ — 具有抗菌特性的產品必須在接種前進行中和，以避免出現假陰性結果
## 用於無菌測試的[](https://www.sigmaaldrich.com)快速微生物學方法（RMM）
隨著監管框架不斷演進以適應創新發展，__快速微生物檢測法（RMM）__正逐漸被接納為傳統藥典無菌檢測的科學驗證替代方案。對於__保質期較短的產品__——例如細胞與基因療法、放射性藥品及短效生物製劑——RMM 尤為重要，因為 14 天的培養期往往與產品放行時程或患者治療計畫不相容。
在最成熟的 RMM 技術中，__ATP 生物發光法__可偵測活微生物與生物發光試劑反應後發出的光，從而實現快速、靈敏且定量的污染檢測。與傳統的培養法不同，ATP 生物發光法以__定量的儀器測量__取代主觀的目視濁度評估，使結果解讀能更早進行且更具可重複性。
《美國藥典》（__USP__）__<73>__——《基於 ATP 生物發光檢測短效產品污染的微生物學方法》——將於 __2025 年 8__ 月生效，其頒布標誌著監管領域的重要里程碑，為實驗室提供了明確的藥典框架，以實施並驗證基於 RMM 的無菌測試。 與此相輔相成的是__《美國藥典》<1071>__，該標準針對快速微生物檢測方法的實施與驗證提供了更廣泛的指引。
RMM 不僅適用於__終端產品的無菌__測試，亦適用於整個製造__流程中的製程生物負荷監測__，為實驗室提供適用於多種品質控制應用且符合規範的靈活解決方案。
[Milliflex® Rapid System 2.0](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/campaigns/rapid-microbial-testing-with-milliflex-rapid-2) 完全符合 __USP <73>__ 的要求，可協助您的實驗室實施經驗證且符合規範的基於 RMM 的無菌測試工作流程——在 __5 天或更短的時間內__提供檢測結果。
## 無菌測試中的資料完整性與治理
無菌測試結果的可靠性取決於其背後數據的可靠性——全球各監管機構均將數據完整性視為 GMP 微生物學合規性的核心。 除了檢測方法之外，無菌測試數據在整個測試生命週期中如何產生、記錄及維護，同樣至關重要。包括美國食品藥物管理局（FDA）、歐洲藥品管理局（EMA）及日本藥品醫療機器綜合機構（PMDA）在內的監管機構，均要求所有實驗室數據須符合 ALCOA++ 原則：數據必須具備可追溯性、可讀性、同步性、原始性及準確性，並對完整性、一致性及可用性有額外要求。
在美國，《聯邦法規彙編》第 21 編第 11 部分（21 CFR Part 11）明確定義了電子紀錄與電子簽名的相關要求，使數位文件在法律上等同於紙本紀錄。在歐洲，歐盟附錄 11（EU Annex 11）則針對 GMP 環境中的電腦化系統制定了同等標準。 這些法規共同為品質控制實驗室數據（包括無菌測試）的數據完整性建立了明確的框架：即時數據擷取、自動生成稽核追蹤紀錄，以及完整的端到端數位可追溯性——從操作員身分識別和儀器數據，到樣本資訊和最終結果——這些在 GMP 稽查期間日益受到監管機構重視，並被視為業界最佳實務。[M-Trace® 軟體與行動應用程式](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/services/software-and-digital-platforms/m-trace-electronic-test-record-software)可協助您的實驗室滿足這些法規要求。
## 無菌測試工作流程
### __傳統藥典工作流程 — 膜過濾法__
以下分步工作流程說明依據__《美國藥典》（USP）<71>__、《__歐洲藥典》__（__Ph. Eur.）2.6.1__ 及__《日本藥典》（JP）<4.06>__ 進行的膜過濾無菌測試__。__
__試驗準備__ — 在受控環境（層流罩或隔離器）內組裝[膜過濾裝置](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/technical-documents/technical-article/microbiological-testing/sterility-testing/steritest-neo-sterility-test)，並將管路連接至[無菌測試泵](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/technical-documents/technical-article/microbiological-testing/sterility-testing/sterility-testing-hardware-accessories)
1. __膜／濾膜沖洗與預潤濕__ — 對濾膜進行預潤濕，以優化過濾效率並將產品對濾膜的吸附降至最低
2. __樣品過濾__ — 將等體積的產品分別過濾至兩個濾罐中；微生物將被截留於 0.45 µm 膜
上
3. __沖洗__ — 使用經驗證的沖洗溶液去除抑制性化合物，以防止出現假陰性結果
4. __培養基填充__ — 將 [SCDM（TSB）及 FTM 無菌培養基](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/technical-documents/technical-article/microbiological-testing/sterility-testing/sterility-testing-membrane-culture-media-rinsing-fluids)
注入膜過濾裝置
5. __培養__ — 於 32.5°C（FTM）及 22.5°C（SCDM）__下培養__ 14 天。這些溫度分別代表《美國藥典》（USP）<71>、《歐洲藥典》（Ph. Eur.）2.6.1 及《日本藥典》（JP）<4.06>
所規定之 30–35°C 及 20–25°C 藥典範圍的中點
6. __結果檢驗__ — 目視檢查濁度；如有任何濁度，必須調查是否為潛在微生物污染
7. __數位測試紀錄__ — 即時、自動將所有測試步驟、操作人員動作及儀器數據匯整至單一、可稽核的電子紀錄中，以符合《[聯邦法規彙編](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/services/software-and-digital-platforms/m-trace-electronic-test-record-software)》[第21篇第11部分（21 CFR Part 11）、ALCOA++數據](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/services/software-and-digital-platforms/m-trace-electronic-test-record-software)完整性原則，並確保具備接受監管稽查的準備狀態
各步驟說明均符合《美國藥典》（USP）<71>、《歐洲藥典》（Ph. Eur.）2.6.1 及《日本藥典》（JP）<4.06> 的藥典要求。步驟 8 反映了 21 CFR 第 11 部分及歐盟附錄 11 對資料完整性的現行監管要求，其規範範圍超越了藥典要求。
## 快速無菌檢測工作流程 — ATP 生物發光法
對於__保質期較短的產品__——包括__細胞與基因療法__、放射性藥品及短效生物製劑——傳統的 14 天培養期往往與產品放行時程不相容。[快速微生物檢測法（RMMs）](https://www.sigmaaldrich.com/TW/zh/technical-documents/technical-article/microbiological-testing/sterility-testing/early-microbial-detection-enumeration-milliflex)提供了一種經科學驗證且符合法規要求的替代方案。
__ATP 生物發光__是無菌檢測中最成熟的 RMM 技術之一。該技術透過檢測活微生物與生物發光試劑反應後發出的光，實現快速、靈敏且定量的污染檢測。 新的《美國藥典》__（USP）<73>__章節——「基於 ATP 生物發光檢測短效產品中污染的微生物學方法」——為採用 RMM 提供了明確的法規框架，並將於 __2025 年 8 月__生效。
典型的 ATP 生物發光快速無菌檢測工作流程如下：
1. __樣本過濾__ — 樣本透過專用膜過濾，以保留活體微生物
2. __添加 ATP 試劑__ — 將生物發光試劑塗佈於膜上，針對活細胞進行檢測
3. __自動化檢測與定量__ — 採用高靈敏度檢測相機，捕捉並定量活微生物發出的光訊號
4. __5 天內出結果__ — 相較於傳統 14 天的藥典方法，結果產出速度最快可提升 75%。實際出結果時間取決於經驗證的方法及產品類型。
5. __電子檢測紀錄__ — 所有結果均記錄於符合 __21 CFR Part 11__ 規範、可完全追溯的數位紀錄中
此工作流程基於《美國藥典》（USP）<73>所述的 ATP 生物發光技術。步驟 5 反映了 21 CFR 第 11 部分及歐盟附錄 11 對資料完整性與電子紀錄保存的現行法規要求。
採用 ATP 生物發光技術的 RMM 適用於無菌測試及製程中的生物負荷監測，為實驗室提供一套適用於整個製造工作流程、兼具多功能性、快速且符合規範的解決方案。
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