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Preparación de los medios

Preparación de los medios de cultivo

La preparaciĆ³n de los medios de cultivo celular afecta de manera significativa al crecimiento de las cĆ©lulas de mamĆ­feros y a los resultados experimentales. De igual forma, hay medios especĆ­ficos formulados para respaldar el cultivo de microorganismos in vitro. Los medios de cultivo proporcionan una fuente de energĆ­a para el crecimiento celular y compuestos que regulan los procesos celulares. Los cultivos de cĆ©lulas procariotas y eucariotas pueden tener requisitos de crecimiento especĆ­ficos. La selecciĆ³n de los medios depende del tipo de cultivo, el propĆ³sito del cultivo y los requisitos de densidad celular.   

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PreparaciĆ³n de los medios

Los medios de cultivo comercializados se suministran en forma deshidratada o en polvo, en concentrado lĆ­quido o como disoluciones de trabajo. Los medios deshidratados para caldos de cultivo tienen que prepararse disolviĆ©ndolos en agua destilada y ajustando el pH final antes de la esterilizaciĆ³n. Los medios en polvo para cultivos en agar deben disolverse en agua destilada, agitarse y luego hervirse o esterilizarse en autoclave antes de verterlos en placas de Petri estĆ©riles utilizando tĆ©cnicas asĆ©pticas. Los medios de cultivo suministrados como concentrados lĆ­quidos deben diluirse de manera asĆ©ptica en agua destilada, ajustarse el pH y dispensarse en recipientes estĆ©riles para su conservaciĆ³n. Los medios de cultivo suministrados como disoluciones de trabajo estĆ”n listos para su uso despuĆ©s de aƱadir el suero requerido u otros suplementos mediante filtraciĆ³n esterilizantes o en condiciones asĆ©pticas, y calentando a la temperatura apropiada para el crecimiento celular.

EsterilizaciĆ³n de los medios de cultivo

Los medios de cultivo preparados a partir de polvo deben esterilizarse mediante filtraciĆ³n, calentamiento o en autoclave antes de utilizarse. Los medios lĆ­quidos suelen suministrarse estĆ©riles y a una concentraciĆ³n lista para usar, pero se recomienda esterilizaciĆ³n mediante filtraciĆ³n, en particular si hay que aƱadir antes de usarlos sueros u otros suplementos. DespuĆ©s de la esterilizaciĆ³n, deben utilizarse tĆ©cnicas asĆ©pticas cuando se manipulen los medios de cultivo para evitar contaminaciĆ³n cruzada o el crecimiento de microorganismos no deseados.

Suplementos para medios de cultivo

Ciertos suplementos requeridos para cultivo o regulaciĆ³n celulares son inestables o termolĆ”biles; por consiguiente, antes de utilizarlos, el usuario debe aƱadirlos a medios de cultivo basales esterilizados por calor. El suero procedente de fuentes bovinas (FBS) es un suplemento comĆŗn utilizado en los medios de cultivo de cĆ©lulas animales. Pueden necesitarse hormonas, factores de crecimiento y molĆ©culas de comunicaciĆ³n especĆ­ficas para el crecimiento de ciertos tipos de cĆ©lulas. Para inducir la expresiĆ³n de proteĆ­nas se utilizan aditivos como el IPTG. TambiĆ©n pueden aƱadirse anticuerpos a los medios de cultivo para controlar el crecimiento de contaminantes bacterianos y fĆŗngicos, aunque la contaminaciĆ³n puede controlarse bien con la manipulaciĆ³n y la conservaciĆ³n adecuada de los medios.

Almacenamiento y uso de los medios de cultivo

Los medios de cultivo comercializados y preparados en forma lĆ­quida, vertidos en forma de agar o en disoluciones de trabajo suelen conservarse a 4 Ā°C en oscuridad para suprimir el crecimiento de microorganismos oportunistas y evitar la degradaciĆ³n de los componentes del medio de cultivo inducida por la luz. Antes de la inoculaciĆ³n, los medios deben calentarse a una temperatura apropiada para el crecimiento celular.

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