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usage
sufficient for 500 reactions
sufficient for 5000 reactions
Quality Level
feature
dNTPs included
hotstart
manufacturer/tradename
Roche
packaging
pkg of 500 x 20 μL reactions (04673484001)
pkg of 5000 x 20 μL reactions (04673492001)
technique(s)
RT-qPCR: suitable
qPCR: suitable
input
purified DNA
detection method
probe-based
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1 of 4
Este artículo | L6544 | S9194 | QR0100 |
|---|---|---|---|
| technique(s) RT-qPCR: suitable | technique(s) qPCR: suitable | technique(s) qPCR: suitable | technique(s) RT-qPCR: suitable |
| usage sufficient for 500 reactions | usage sufficient for 100 reactions, sufficient for 2000 reactions, sufficient for 500 reactions | usage sufficient for 20 reactions, sufficient for 2000 reactions, sufficient for 400 reactions | usage sufficient for 250 reactions |
| feature dNTPs included: no | feature dNTPs included, hotstart | feature dNTPs included, hotstart | feature dNTPs included, hotstart |
| manufacturer/tradename Roche | manufacturer/tradename - | manufacturer/tradename - | manufacturer/tradename - |
| packaging pkg of 500 x 20 μL reactions (04673484001) | packaging - | packaging - | packaging - |
| input purified DNA | input purified DNA | input purified DNA | input purified RNA |
General description
FastStart™ SYBR® Green Master es una mezcla de reacción de inicio en caliente lista para ser utilizada sin ROX para la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) en sistemas de PCR en tiempo real con transcriptasa inversa (RT)-qPCR distintos de los equipos LightCycler®. Esta mezcla maestra simplifica la preparación de las reacciones para la detección y el análisis del ADN. En combinación con un equipo de PCR en tiempo real, los cebadores de PCR adecuados y una sonda de hidrólisis, FastStart™ TaqMan® Probe Master permite la detección y la cuantificación muy sensibles de secuencias de ADN definidas.
El SYBR® Green I es un colorante específico para el ADN bicatenario. Durante cada fase de síntesis de ADN, el colorante SYBR® Green I, que está incluido en la mezcla de reacción, se une a los productos amplificados de la PCR. El amplicón puede detectarse por su fluorescencia.
Se ha demostrado que los protocolos de inicio en caliente mejoran de manera significativa la especificidad, la sensibilidad y el rendimiento de la PCR. Grupos de bloqueo termolábiles en algunos de los restos de aminoácido de la ADN polimerasa Taq FastStart™ inactivan la enzima modificada a temperatura ambiente. Por consiguiente, no hay elongación durante el periodo en el que los cebadores pueden unirse de manera inespecífica. La ADN polimerasa Taq FastStart™ se activa eliminando los grupos bloqueantes a una temperatura elevada (es decir, una etapa previa a la incubación a +95°C).
El FastStart™ SYBR® Green Master puede utilizarse para la amplificación y la detección de cualquier ADN o ADNc específicos, incluso los que son ricos en GC o AT. Sin embargo, habría que adaptar el protocolo de detección a las condiciones de reacción del equipo de PCR en tiempo real concreto utilizado y diseñar cebadores PCR específicos para cada diana.
Combine esta mezcla maestra con nuestro kit Transcriptor para la síntesis de la cadena primaria del ADNc para conseguir resultados excelentes en la qRT-PCR en dos etapas.
Application
- en la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) para cuantificación de la concentración de virus adenoasociados (AAV)[1]
- en qPCR para determinar el nivel de expresión de diferentes genes Col6a1-3 relativos a la gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH)[2]
- en la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real cuantitativa (qRT-PCR) del ARNm del receptor-1 de estrógenos acoplado a la proteína G (GPER)[3]
- en la qRT-PCR para estudios de expresión génica[4]
Utilice la mezcla FastStart™ SYBR® Green Master con cualquier equipo de PCR en tiempo real que no sea un LightCycler®.
Features and Benefits
- Mayor sensibilidad y especificidad de la PCR.
- Evita la sobrevaloración de los resultados de la qPCR:
- Amplifica y detecta una amplia variedad de ADN y ADNc específicos.
- Utilice cualquier equipo de PCR en tiempo real que no sea un equipo LightCycler®:
- Ahorre tiempo y esfuerzo en la preparación de la qPCR:
- Evite los resultados falsos positivos que aparecen como consecuencia de la contaminación por arrastre:
Analysis Note
Other Notes
En principio, el FastStart SYBR Green Master puede utilizarse para la amplificación y la detección de cualquier ADN o ADNc específico, incluso los ricos en GC o AT. Sin embargo, para cada diana, se necesitará:
- adaptar el protocolo de detección a las condiciones de reacción del equipo de PCR en tiempo real, así como
- diseñar los cebadores de PCR específicos para la diana.
Consulte las recomendaciones generales del Manual del operario del instrumento de PCR en tiempo real.
Dos formas disponibles
La mezcla maestra está disponible en dos formas, una que contiene el colorante de referencia ROX y otra sin ROX.
Prevención de la contaminación por arrastre
Esta mezcla maestra contiene dUTP, que se incorporará a los productos de la PCR para contribuir a evitar la aparición de falsos positivos resultantes de la contaminación por arrastre. En las PCR subsiguientes, puede añadirse uracil-ADN glucosilasa para degradar cualquier contaminante por arrastre que contenga uracilo (productos de la amplificación de PCR anteriores).
qRT-PCR
Combine esta mezcla maestra con nuestro kit transcriptor de síntesis de la cadena primaria del ADNc (Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit) para qRT-PCR en dos etapas. Este kit aporta resultados excelentes y funciona con eficiencia en todos los equipos de PCR en tiempo real.
Legal Information
Clase de almacenamiento
12 - Non Combustible Liquids
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WGK 1
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Artículos
The purpose of Hot Start PCR is to inhibit the PCR reaction in order to reduce nonspecific amplification, prevent the formation of primer dimers, and increase product yields.
PCR master mix simplifies PCR/RT-PCR with components like DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, and buffer, available commercially or DIY.
Watch these videos to learn how real time or quantitative PCR (qPCR) works and the benefits of both the SYBR Green-based and probe-based methods of qPCR assay.
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Gain unprecedented insight into the biology of cancer development and progression. Roche Applied Science's tools for gene expression analysis allow fast and accurate measurement of gene regulation and expression levels.
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de amplificación de moléculas de ácidos nucleicos y se utiliza habitualmente en muchas aplicaciones, entre ellas la RT-PCR (retroPCR), la PCR de inicio en caliente, la PCR de punto final.
Polymerase chain reaction (PCR) is a technique for amplifying nucleic acid molecules and is commonly used in many applications, including RT-PCR, hot start PCR, end point PCR and more.
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