Lọc mẫu

Một số kỹ thuật làm sạch phổ biến nhất sau đây được sử dụng trong phòng thí nghiệm để chuẩn bị mẫu cho các bước phân tích tiếp theo.

Thẩm tách

Thẩm tách là một kỹ thuật tinh chế được sử dụng để loại bỏ muối hoặc các phân tử có trọng lượng phân tử thấp khác khỏi mẫu. Kỹ thuật này cũng được sử dụng để thay đổi thành phần dung dịch đệm của mẫu. Thẩm tách là một kỹ thuật thụ động đòi hỏi lượng lớn dung dịch đệm.

Thay đổi dung dịch đệm & Loại bỏ muối

Loại bỏ muối là một phương pháp đơn giản để loại bỏ muối và các tạp chất có trọng lượng phân tử thấp khác khỏi mẫu. Phương pháp này cũng được sử dụng để trao đổi dung dịch đệm trước hoặc sau các bước sắc ký khác nhau và để loại bỏ nhanh các thuốc thử nhằm kết thúc phản ứng.

Kết tủa từng phần

Kết tủa phân đoạn được sử dụng để loại bỏ các tạp chất thô khỏi các thể tích mẫu nhỏ. Các kỹ thuật kết tủa tách các phân đoạn theo nguyên tắc độ hòa tan khác nhau. Do các loại protein khác nhau về mức độ kỵ nước, nồng độ muối tăng có thể tăng cường tương tác kỵ nước giữa các protein và gây ra kết tủa.

Chiết xuất

Chuẩn bị mẫu bằng phương pháp chiết xuất bao gồm việc phân lập các chất phân tích mục tiêu từ một mẫu phức tạp hoặc thể tích mẫu lớn hơn nhiều. Quá trình này loại bỏ các thành phần mẫu gây nhiễu có thể làm tắc nghẽn cột HPLC và GC. Nó cũng làm tăng nồng độ chất phân tích lên gấp 100 đến 5.000 lần, từ đó cải thiện đáng kể độ nhạy phát hiện. Là một phần của quá trình chuẩn bị mẫu chọn lọc và cụ thể, chiết xuất giúp đảm bảo phân tích sắc ký đáng tin cậy hơn. Các loại chiết xuất bao gồm chiết xuất lỏng-lỏng, chiết xuất pha rắn (SPE) và chiết xuất vi pha rắn (SPME).

Sắc ký ái lực

Chromatography liên kết tách các protein dựa trên các tương tác có thể đảo ngược giữa protein và một chất liên kết cụ thể đã được gắn vào ma trận chromatography. Kỹ thuật này có độ chọn lọc cao và cho phép tinh chế protein với công suất lớn. Chromatography liên kết có thể được sử dụng bất cứ khi nào có sẵn một chất liên kết phù hợp cho protein mục tiêu.

Quá trình tinh chế bằng sắc ký ái lực bao gồm các bước bắt giữ và rửa giải. Trong giai đoạn bắt giữ, protein mục tiêu được gắn kết một cách cụ thể và có thể đảo ngược với một chất liên kết bổ sung đã được cố định trên ma trận sắc ký. Mục tiêu là tách biệt, cô đặc và ổn định sản phẩm mục tiêu, đồng thời bảo toàn hoạt tính và hiệu lực của nó. Sau khi rửa ma trận để loại bỏ các chất không liên kết, protein mục tiêu đã liên kết được thu hồi bằng cách thay đổi các điều kiện sang những điều kiện thuận lợi cho quá trình rửa giải. Quá trình rửa giải được thực hiện một cách cụ thể, bằng cách sử dụng một chất liên kết cạnh tranh, hoặc không cụ thể, bằng cách thay đổi độ pH, độ mạnh ion hoặc độ phân cực. Quá trình rửa giải cho phép thu thập protein mục tiêu ở dạng tinh khiết và cô đặc.