FLAG^® Tag Vector biểu hiện của vi khuẩn và động vật có vú

• FLAG^® Tag Expression Vector Maps và 3xFLAG^® peptide
•   Trình tự DNA gắn thẻ FLAG ® và trình tự peptide của axit amin 3xFLAG ®
• FLAG ® và 3x FLAG^® Các sản phẩm Vector biểu hiện vi khuẩn và động vật có vú
• FLAG ® và 3xFLAG^®: Một hệ thống đã được chứng minh để phát hiện và tinh chế protein
• Các kháng thể đặc hiệu cao để GẮN CỜ^® và 3xFLAG^® epitope
•   Biểu đồ so sánh sản phẩm kế thừa SnapFast™ FLAG ® và Vector 3xFLAG ®

FLAG^® Tag Expression Vector Maps và 3xFLAG^® peptide

Các vectơ biểu hiện vi khuẩn và động vật có vú, hoặc cấu trúc biểu hiện, là các plasmid biến đổi DNA lưu thông thường được sử dụng để biểu hiện quá mức các protein tái tổ hợp quan tâm. Các trình tự duy nhất được mã hóa trong cấu trúc vector chứa các yếu tố promoter được công nhận bởi bộ máy tổng hợp protein của các tế bào được chuyển đổi để thúc đẩy sự biểu hiện của chuỗi protein kết hợp.

 Hệ thống biểu hiện FLAG ® là một cách thiết lập để biểu hiện, tinh chế và phát hiện các protein tổng hợp tái tổ hợp.   Thuốc thử FLAG ® và 3xFLAG ® đã được chứng minh là có ích trong nhiều ứng dụng như blotting phương Tây, hóa học tế bào miễn dịch, công thức miễn dịch, cytometry dòng chảy, tinh chế protein, nghiên cứu về tương tác protein-protein, cấu trúc cực đoan của tế bào và địa phương hóa protein. Các thẻ ưa nước nhỏ này tạo điều kiện để phát hiện và tinh chế vượt trội các protein tổng hợp tái tổ hợp khi sử dụng kháng thể CHỐNG CỜ ® đặc hiệu cao và nhạy cảm của chúng tôi.

  Trình tự DNA gắn thẻ FLAG ® và trình tự peptide của axit amin 3xFLAG ®

 Hệ thống biểu hiện FLAG ® sử dụng một peptide axit amin 8-ưa nước ngắn, hợp nhất với protein tái tổ hợp quan tâm. Do tính chất ưa nước của nó, peptide FLAG ® có khả năng nằm trên bề mặt của protein tổng hợp. Kết quả là, có thể dễ dàng tiếp cận peptide FLAG ® để phân tách bằng enterokinase (EK) và để phát hiện bằng kháng thể. Ngoài ra, do kích thước nhỏ của thẻ peptide FLAG ®, nó không có khả năng che khuất các epitope, miền hoặc thay đổi chức năng, bài tiết hoặc vận chuyển protein tổng hợp.

 Hệ thống 3xFLAG ® là một cải tiến so với hệ thống ban đầu bằng cách hợp nhất 3 epitope CỜ ® tiếp đôi (22 axit amin). Việc phát hiện protein tổng hợp chứa 3xFLAG^® được tăng cường gấp 200 lần so với bất kỳ hệ thống nào khác. Giống như thẻ FLAG ® ban đầu, 3xFLAG^® là ưa nước, có vị trí phân tách Ek và tương đối nhỏ. Do đó, nguy cơ thay đổi chức năng protein, ngăn chặn các epitope khác hoặc giảm độ hòa tan được giảm thiểu.

  Trình tự axit amin FLAG ® và 3xFLAG ®

  Có thể loại bỏ thẻ N-terminal FLAG ® (8 axit amin) và thẻ 3xFLAG ® (22 axit amin) bằng cách sử dụng enterokinase, tách ra theo trình tự axit amin Asp-Asp-Asp-Lys ở đầu c của thẻ.

FLAG ® và 3x FLAG^® Các sản phẩm Vector biểu hiện vi khuẩn và động vật có vú

  Các vectơ biểu hiện FLAG ® và 3xFLAG ® cổ điển đã được chuyển đổi thành các vectơ biểu hiện SnapFast™ – kết hợp hai hệ thống chức năng cao thành một sản phẩm. Thông tin bổ sung về hệ thống SnapFast™ bao gồm các vector Background & Popular, Selection Charts và các câu hỏi thường gặp về SnapFast™.

  Các vectơ FLAG ® và 3xFLAG ® có sẵn để biểu hiện vi khuẩn và động vật có vú, sử dụng T7, Tac hoặc CMV promoter. Các vectơ có một vị trí phân tách enterokinase để loại bỏ thẻ khỏi protein tinh khiết. Cùng với c-myc, một số vectơ cung cấp nhãn kép. Xem biểu đồ dưới đây để biết thông số kỹ thuật vector tham chiếu nhanh và nhấp vào liên kết đến các trang sản phẩm để biết thêm thông tin, bao gồm cả bản đồ vector.

FLAG ® và 3xFLAG^®: Một hệ thống đã được chứng minh để phát hiện và tinh chế protein

Biểu hiện mức độ thấp của protein tái tổ hợp trong tế bào động vật có vú là một vấn đề phổ biến thường làm cho việc phát hiện thẻ epitope trở nên khó khăn hoặc không thể. Phát hiện 3x LÁ CỜ^® bằng cách sử dụng Ab CHỐNG GẮN CỜ ® M2 và HRP chống chuột nhạy hơn 20-200 lần so với bất kỳ thẻ nào thường sử dụng. Bộ sưu tập mở rộng các vectơ p3xFLAG ® sử dụng bộ khởi động CMV mạnh để thúc đẩy thể hiện.

Blot phía tây của phosphatase kiềm vi khuẩn 3xFLAG ® tinh khiết và phốtatase kiềm của vi khuẩn FLAG ® được chuyển vào màng nitrocellulose. Phát hiện được thực hiện với kháng thể đơn dòng CHỐNG CỜ ® M2 như kháng thể thứ cấp, chống chuột-HRP và chất nền phát quang hóa ECL™.

Các hỗn hợp đầu C của GST và các thẻ liệt kê ở trên đã được chuẩn bị và phân tích trên các vết mực phương Tây. Tất cả các protein được phát hiện bằng cách sử dụng các kháng thể thẻ thích hợp, HRP chống chuột và ECL.

Các kháng thể đặc hiệu cao để GẮN CỜ^® và 3xFLAG^® epitope

Các  chuỗi FLAG ® và 3xFLAG ® bao gồm các vị trí gắn kết cho một số  kháng thể đơn dòng đặc hiệu cao (M1, M2, M5) và các kháng thể và liên hợp đa dòng, mỗi kháng thể có các đặc điểm nhận dạng và ràng buộc khác nhau.  Kháng thể ANTI-FLAG ® thể hiện ít hoặc không có phản ứng chéo ở hầu hết lysates tế bào động vật có vú và vi khuẩn. Các định dạng tinh chế một bước bao gồm gel ái lực và tấm 96 giếng.

  Biểu đồ so sánh sản phẩm kế thừa SnapFast™ FLAG ® và Vector 3xFLAG ®

Lưu ý: Nếu trước đây bạn đã sử dụng vector cờ ®, biểu đồ này sẽ giúp bạn chọn CỜ SnapFast™^® và vector 3xFLAG ® gần nhất.