使用SUPELCOSIL™和ASCENTIS®色谱柱进行氨基酸的衍生化、水解和HPLC分析


 介绍

在许多情况下,确切了解蛋白定量对于蛋白质化学应用是必需的。氨基酸分析能够准确定量蛋白质,详细描述相对氨基酸组成和游离氨基酸的信息。相对氨基酸组成可提供足以用于蛋白质鉴定的蛋白质特性曲线,常被用作蛋白质碎片化选择蛋白酶的决定性因素。

氨基酸分析包括以下步骤:

  • 水解
  • 分离
  • 检测
  • 定量

 

 水解

水解通常采用酸性条件来实现。标准方法是使用6 M盐酸(24小时,110°C)进行水解,平衡时间和温度需求。敏感型氨基酸(特别是色氨酸和半胱氨酸)将在水解过程中被部分破坏。通过气相水解和加入其它酸(如,丙酸,TFA,甲磺酸)可缩短水解时间,并提高敏感型氨基酸产率。

 

 分离、检测和定量

水解样品(氨基酸)衍生化,以实现灵敏的HPLC分离和检测。柱后衍生化是经典方法;其中,柱前衍生化方法更受欢迎,可通过使用更广泛的衍生化试剂实现。内标和外标是关键。

色谱柱的选择是实验设计的关键因素。Supelco的SUPELCOSIL™和ASCENTIS®色谱柱是能够满足氨基酸分析需求的理想选择。