HybriScan®

引言:饮料、食品和水中微生物的快速检测、鉴定和定量

新型HybriScan检测系统采用夹心杂交检测法,可对饮料、食品和水中的腐败和病原微生物进行快速、灵敏、可靠的检测、鉴定和定量。它是所有生产步骤中对原料和浓缩物进行全面可靠的常规控制,直至成品质量检验的理想检测方法。HybriScan还是一种简单、省时的检测方法,可以用标准实验室设备进行(参见图1)。

 

HybriScan检测方法的工作流程


图1:HybriScan检测方法的工作流程  

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优于常规检测方法和PCR

与传统方法相比,HybriScan具有显著的省时省力优势。与PCR和实时PCR相比,它也具有优势,尽管PCR和实时PCR具有高敏感性,但容易受到实验干扰的影响,如模板因纯化不足而受到抑制[1],并且由于与PCR和逆转录反应相关的偏差(与这些方法相关的普遍接受的错误)而缺乏定量准确性。相反,HybriScan方法几乎与样品基质的影响无关,只对活细胞进行检测。它还能检测不可培养的微生物。表1比较了各种方法的优缺点。

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HybriScan优于其他检测技术的优势

 

检测技术 优点 缺点
HybriScan
  • 只检测活细胞 
  • 样品基质的干扰最小
  • 高特异性
  • 低交叉反应性
  • 易处理
  • 有成本效益的读出设备
  • 定量和定性
  • 高样品通量(96-微孔板)
  • 检测不可培养的微生物
  • 无血清型或亚种分化
  • 有限的探针设计(rRNA靶标)
PCR
  • 高样品通量
  • 敏感
  • 定量
  • 无活/死细胞分化
  • 对基质干扰敏感(高提取力)
  • 易受聚合酶抑制
 酶联免疫吸附实验(ELISA)
  • 血清型或亚种的分化
  • 高样品通量(96-微孔板)
  • 定量和定性
  • 低灵敏度
  • 特异性低,交叉反应性较高
  • 化验开发进度慢且成本高
常规培养法
  • 相对便宜
  • 简单
  • 特定
  • 广为接受的方法
  • 耗时(最长10天)
  • 未检出不可培养微生物
  • 样品通量低
  • 费力


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HybriScan检测方法的原理

HybriScan方法通过杂交事件和特定的捕获及检测探针检测rRNA(图2)。来自粗制细胞样本或与PCR相关的夹心杂交检测法已广泛用于临床诊断,以检测来自细菌 [3, 9, 10] 和病毒[11]的核酸。特异性是通过靶向保守或独特的rRNA序列实现的。使用有标记的捕获探针将靶序列固定在固相支持板(涂布微量滴定板)上。标记的检测探针可提供酶联光信号读出。抗体标记酶应用检测结果。结合复合物通过显色底物显现。在450nm处测量光度数据并与标准溶液进行比较。HybriScan软件可以方便地进行测量和数据分析。

HybriScan夹心杂交检测法的原理。


图2:HybriScan夹心杂交检测法的原理。

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HybriScan技术的敏感性、特异性、灵活性和适用性

夹心杂交法非常灵敏,可检测各自靶rRNA分子的摩尔数。[2]细菌和酵母理想的杂交靶标是rRNA。这些细胞含有大量含rRNA的核糖体;因此,单个细胞含有数千个rRNA拷贝,但只有一个DNA。夹心杂交在粗生物样品中也具有灵敏度,因为它不易受基质干扰。通过使用特异性探针,HybriScan可进行灵活的群特异和种特异性检测。它适用于许多分析领域,包括监测啤酒、葡萄酒、非酒精饮料、饮用水、多种食品和废水的微生物含量。HybriScan可以快速准确地识别、检测和量化许多重要的致病物种,包括沙门氏菌、弯曲杆菌、李斯特菌和军团菌包括最相关的物种L。嗜肺军团菌。[3, 4, 5]

HybriScan单核细胞增生李斯特菌:快速新型测试系统

最重要的食源性致病菌之一是单核细胞增生李斯特菌(图3),可对冷藏保质期长的食品构成健康威胁。[6]摄入被单核细胞增生李斯特菌污染的食物引起的李斯特菌病近年来急剧增加,不仅给患者造成很大的痛苦,甚至可能导致死亡。被这种病原体污染的牛奶、奶酪、冰淇淋和肉类导致了近期李斯特菌病的爆发。[7] 单核细胞增生李斯特菌可在冷藏温度下增殖,能够在4.39~9.40的宽pH范围内生长。这些都是食品安全方面的重要特征[12]。

PALCAM琼脂上生长的单核细胞增生李斯特菌菌落。HybriScan单核细胞增生李斯特菌可在1小时内快速鉴定可疑菌落

图3:PALCAM琼脂上生长的单核细胞增生李斯特菌菌落。HybriScan单核细胞增生李斯特菌可在1小时内快速鉴定可疑菌落。

常规培养基方法检测单核细胞增生李斯特菌一般先进行选择性富集,然后在选择性培养基上培养、分离和生化鉴定。[8]这种费时费力的方法往往需要几天才能显示出结果。而且,与分子生物学和免疫学方法相比,培养基方法往往会产生假阴性。HybriScan单核细胞增生李斯特菌是长期培养基方法的绝佳替代品。它与传统方法一样可靠和全面,但可以在48小时内快速得到检测和数量结果。种特异性探针可直接检测单核细胞增生李斯特菌,从而消除其他李斯特菌种引起的假阳性。更引人注目的是,使用HybriScanI鉴定试剂盒可在1小时内鉴定出可疑的单菌落,无需进一步培养。图4显示了HybriScan单核细胞增生李斯特菌的验证结果。根据§ 64 LFGB标准,食品样品分别用HybriScan方法和培养基方法进行了分析和比较。共测试了五种不同的食品类别。验证结果显示相对准确度为99.2%,相对特异性为98.5%,相对灵敏度为99.6%。有两个版本可用。HybriScanI单核细胞增生李斯特菌用于对L的可疑菌落进行极其快速、灵敏和经济的鉴定。单核细胞增生李斯特菌。HybriScanD单核细胞增生李斯特菌用于检测、鉴定和定量不同食物基质中的单核细胞增生李斯特菌。

HybriScan试剂盒是Sigma-Aldrich公司和Scanbec有限公司联合开展的一项项目成果。

HybriScan验证单核细胞增生李斯特菌。根据§64 LFGB对355份食品样品进行分析并与培养基方法进行比较。蓝色值是每个类别的食品样品检测到的单核细胞增生李斯特菌阳性值。验证标准基于ISO 16140:2003 (ASU L00.00-22)



图4:HybriScan验证单核细胞增生李斯特菌。根据§64 LFGB对355份食品样品进行分析并与培养基方法进行比较。蓝色值是每个类别的食品样品检测到的单核细胞增生李斯特菌阳性值。验证标准基于ISO 16140:2003 (ASU L00.00-22)。

 

HybriScan试剂盒产品列表

 

类别编号 描述
产品目录编号
旧名称 反应 添加到购物车
检测试剂盒
62533 HybriScanD 啤酒 FS G 01 FastScan 啤酒 96
56917 HybriScanD 弯曲杆菌 - - - - 96
68301 HybriScanD 饮料 FS G 02 FastScan饮料 96
96343 HybriScanD 大肠杆菌 FS F 05 FastScan 大肠杆菌 96
12838 HybriScanD阪崎肠杆菌 - - - - 96
59744 HybriScanD乳酸菌 FS G 04 FastScan乳酸菌 96
16593 HybriScanD军团菌 FS W 01 FastScan军团菌 96
07190 HybriScanD嗜肺军团菌 FS W 02 FastScan嗜肺军团菌 96
55661 HybriScanD李斯特菌 FS F 03 FastScan李斯特菌 96
49699 HybriScanD单核细胞增生李斯特菌: FS F 04 FastScan单核细胞增生李斯特菌 96
55662 HybriScanD沙门菌 FS F 01 FastScan沙门菌w 96
02349 HybriScanD细菌总数 FS B 01 FastScan细菌总数 96
04447 HybriScanD废水HybriScan菌 FS W 04 FastScan废水HybriScan菌 96
78436 HybriScanD废水细菌总数 FS W 03 FastScan废水细菌总数 96
61397 HybriScanD酵母 FS G 03 FastScan酵母 96
标识:试剂盒
79742 HybriScanI布氏酵母菌 FS I 09 FastScan布氏酵母菌 48
19503 HybriScanI白色念珠菌 FS I 08 FastScan白色念珠菌 48
76545 HybriScanI 大肠杆菌 FS I 04 FastScan大肠杆菌 48
75724 HybriScanI短乳杆菌 FS I 10 FastScan短乳杆菌 48
80065 HybriScanI布氏乳杆菌 FS I 12 FastScan布氏乳杆菌 48
86827 HybriScanI林氏乳杆菌 FS I 11 FastScan林氏乳杆菌 48
49417 HybriScanI 嗜肺军团菌 FS I 06 FastScan嗜肺军团菌 48
77007 HybriScanI 明串珠菌 FS I 13 FastScan明串珠菌 48
49712 HybriScanI单核细胞增生李斯特菌: FS I 01 FastScan单核细胞增生李斯特菌 48
42875 HybriScanI巨型球菌 FS I 17 FastScan巨型球菌 48
89384 HybriScanI嗜啤酒梳状菌 FS I 16 FastScan嗜啤酒梳状菌 48
73582 HybriScanI福瑞森加梳状菌 FS I 15 FastScan福瑞森加梳状菌 48
67289 HybriScanI有害片球菌 FS I 14 FastScan有害片球菌 48


表2:
HybriScan产品(HybriScanD =检测试剂盒;HybriScanI=鉴定试剂盒)

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参考文献
  1. Bustin,S.A.使用实时逆转录聚合酶链反应测定法对mRNA进行绝对定量。J.摩尔内分泌。2000,25,169-193.
  2. 滕汉恩,J.;埃洛兰塔,J.;卡利欧,A.;Soderlund,H.一种定量mRNA的溶液杂交方法:测定癌基因mRNA量及其稳定性。遗传分析。技术应用1990,7,228-233.
  3. 胡塔梅拉,S.;莱诺宁,M.;尼明,T.;法纳特, B.;米勒科斯基,L.;布里滕斯坦,A.;Neubauer,P。基于RNA的夹心杂交法检测啤酒厂样品中的乳酸菌。J. 微生物方法:2007, 68(3),543-53.
  4. 莱斯克拉,T.;蒂尔萨拉-蒂米斯贾尔维,A.;库斯涅佐夫,J.;纽鲍尔,P.;布里滕斯坦,A。基于16S rRNA的夹心杂交法检测军团菌的敏感属特异性。J. 微生物方法:2005, 62(2),167-79.
  5. 劳蒂奥,J。巴肯,KB。;拉赫登佩拉,J.;布里滕斯坦,A.;莫林, S.;Neubauer,P.夹心杂交法定量检测粗制细胞裂解液中的酵母RNA。微生物CELLFact.2003, 2(1),4-12.
  6. 梅勒芬顿,L.A.;麦克米金,T.A.;Ross,T.共培养中相对接种浓度对单核细胞增生李斯特菌生长的影响。Int.J. 食品微生物。2008,121,157-168.
  7. 麦克劳克林,J.李斯特菌与李斯特菌病的关系。食品管制1996年,7,187-193。
  8. 唐纳利,C.W.,从食品样品中检测和分离单核细胞增生李斯特菌:亚致死性损伤的意义,J.AOAC Int.2002,85,495-500.
  9. Casademont I,Bizet C,Chevrier D和Guesdon JL使用与微孔共价结合的寡核苷酸,通过聚合酶链式反应结合非放射性杂交法快速检测胎儿弯曲杆菌。MolCELLProbes2000,14,233-240
  10. Chevrier D、Popoff MY、Dion MP、Hermant D和Guesdon JL在微板上使用共价固定的寡核苷酸,通过PCR结合非放射性杂交法快速检测沙门氏菌亚种I。FEMS免疫药物微生物。1995, 10(3-4),245–501.
  11. Albretsen C,Kalland KH,Haukanes BI,Havarstein LS和Kleppe K应用磁珠与共价键合寡核苷酸进行杂交:从粗细胞裂解液中分离和检测特定的麻疹病毒mRNA。分析。生物化学。1990,189,40-50
  12. 特伦代尔,M.,德特洛伊,P.,德贝维尔,J。沙门氏菌、空肠弯曲菌、结肠弯曲菌和单核细胞增生李斯特菌在家禽屠体和比利时零售市场出售的不同类型家禽产品中的发病率。《食品保护杂志》 1999年,第62期,第735-740页。

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HybriScan废水计量器


针对废水试剂盒(04447 HybriScanD废水微丝菌,78436 HybriScanD废水细菌总数)我们提供了一张excel表格,用于计算细菌总数、微丝菌数量及微丝菌的比率:细菌总数。

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Hybriscan Waste Water Calculator English

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废水计量器英文
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废水计量器德文

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