固相萃取

HybridSPE-磷脂技术

HybridSPE-Plus板—新一代HybridSPE-磷脂技术


我们的新型HybridSPE-Plus板具用和传统HybridSPE-磷脂板相同的久经考验的固定相,源于HybirdSPE磷脂板多年的生产经验,提升了板的功能。这些提升的功能使我们能够提高孔间流速的一致性并减少样品保留体积,进而提高分析物回收率和检测方法的重复性。对于已在传统HybirdSPE-磷脂板上开发出方法的客户,我们将继续供应并提供服务,但我们邀请正在开发新方法的客户来利用最新技术:HybridSPE-Plus。


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磷脂对LC-MS数据准确度和重复性的影响


磷脂:小分子生物样品LC-MS分析的隐患

磷脂是所有细胞膜的主要成分,存在于包括血清、血浆和全血在内的所有生物样品中。由于它们经常与目标分析物共同洗脱和离子化,在用LC-MS分析生物小分子是可能会存在问题。这种共洗脱可导致质谱信号的离子抑制(一种错误性降低),从而产生变异性并影响LC-MS结果的准确性(图1)。
图1.磷脂对可乐定离子化的影响



生物分析中准确结果和快速分析的重要性
在Supelco,我们理解您的分析结果可能对许多其他生命具有重要影响。这迫使您确保所得数据尽可能准确。您不仅需要快速获得答案,还需要获得值得信赖的答案。样品类型的复杂性会使您的工作不那么轻松。当使用LC-MS或LC-MS/MS等灵敏技术时,样品中不同程度的固有蛋白质和磷脂会增加分析结果的变异性。Supelco拥有四十多年的色谱分析经验,可帮助您降低样品制备选择的复杂程度。

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生物样品传统样品制备方法的局限性


传统生物样品净化方法的局限性
大部分临床和生物学研究人员利用蛋白质沉淀和液液萃取等传统技术进行分析前的样品净化。尽管这些技术可以实现经济、快速的蛋白质去除,但是它们无法解决磷脂介导的离子抑制问题。

即使磷脂不与目标分析物共同洗脱,它们也会积累在分析柱内,并在下游分析中从色谱柱上零星的洗脱出来。这会导致意外的离子抑制和较低的重复性,从而降低分析结果的准确性(图2)。
图2. 标准蛋白质PPT和HybridSPE-磷脂技术在反相梯度LC-MS分析空白血浆样品的结果对比

使用标准蛋白质PPT技术多次进样后观察到的背景干扰


使用HybridSPE-磷脂技术多次进样后观察到的背景干扰


多次进样后C18 1.8 µm色谱柱(5 cm x 2.1 mm)内产生的背压


磷脂去除技术
为解决磷脂基质导致的离子抑制问题,一些分析人员尝试使用传统SPE。传统SPE通常需要耗时且复杂的方法开发,但是却仅能去除少量的磷脂。剩余的磷脂会影响结果的准确性、积累在分析柱上从而影响后续分析、增加色谱柱更换成本并延长仪器故障时间。
现在,市面上有很多去除蛋白质和磷脂的产品,包括HybridSPE沉淀板和萃取柱。其中,大部分产品简单、快速且易于使用,仅需极少的方法开发即可提供相当标准化的方法。然而,大多数产品采用疏水性保留机理从样品中分离磷脂和目标分析物。如果目标分析物也是疏水性的,那么它们将会被保留并与疏水性磷脂一起被去除,这会导致分析物回收率降低和结果不准确等问题。HybridSPE磷脂技术的不同之处在于,它能完全去除样品中的蛋白质和磷脂,同时不会保留其他疏水性化合物。

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HybridSPE-磷脂技术的独特化学过程和基本方法


HybridSPE-磷脂技术与其他磷脂去除产品有什么不同?
2008年推出的HybridSPE-磷脂技术是同类产品的首次面世。它结合了传统蛋白质沉淀技术的简单化、标准化和固相萃取(SPE)的特异性,可在LC-MS分析前同时去除生物样品中的蛋白质和磷脂。其他磷脂去除产品利用疏水性保留机理去除生物样品中的磷脂,而HybridSPE-磷脂技术的不同之处在于其采用独特的保留机理(图3),甚至可以将磷脂与疏水性非常强的分析物分离,例如在竞争品牌产品上经常与磷脂一起保留的维生素。
访问 sigma-aldrich.com/hybridspe-pl,了解关于HybridSPE-磷脂技术的更多信息并查看产品的视频。

图3. HybridSPE®-磷脂技术独特的保留机理可将生物样品中强疏水性分析物与磷脂污染物分开


用于磷脂去除的更新、更好的“Go-to”样品制备方法
分析生物样品的实验室通常选择在LC-MS分析前进行蛋白质沉淀,以此作为其“Go-to”样品制备方法。他们认为,如果样品中的特定目标分析物不会与磷脂共同洗脱,那么磷脂去除就是一个更昂贵、更耗时和不必要的步骤。但是事实并非如此。

在生物小分子LC-MS分析前利用HybridSPE-磷脂技术从所有生物样品中去除蛋白质和磷脂,可为实验室降低整体成本并提高整体通量,同时获得更准确的结果。

简单、快速的磷脂去除
96孔板实验方案仅需几个简单的步骤(图4和5),并且从包装中取出板后即可使用,无需预处理步骤。首先在96孔板中加入样品(如有需要,可加入内标)和沉淀溶剂,然后混合,并抽真空收集样品。随后,收集所得样品可立即用于分析。


图4. HybridSPE-磷脂样品制备基本工作流程图



图5. HybridSPE 96孔板实验方案


  1. 添加样品
    取100 µL血浆或血浆加至HybridSPE板中,然后加入300 µL沉淀溶剂。根据需要,加入内参。
  1. 混合
    涡旋/振荡HybridSPE板或使用0.5–1 mL移液器吸头吹打。
  1. 抽真空
    带滤片的填料床/烧结组件作为深层过滤器,可同时物理性的去除蛋白质和吸附磷脂。而目标小分子(如,药物化合物和代谢物)被无保留地过滤出来。从而达到净化
  1. 收集样品
    所得过滤物/洗脱物不含蛋白质和磷脂,可立即用于LC-MS/MS分析。

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技术资源

分类/标题 类型 大小 (kb) 页数 编号
Instructions for HybridSPE®-PLus 96-Well Plates 数据单页 105 2 T713202
Instructions & Troubleshooting for HybridSPE®-Phospholipid Ultra Cartridge 数据单页 350 2 T710124
Investigating Matrix Interference in Analysis of Antiarrhythmic Cardiac Drugs in Plasma (Reporter 31.1) 文章 - - -
Isolation and LC-MS Characterization of Illicit Bath Salts in Urine (Reporter 30.3) 文章 - - -
Meeting the LC-MS Needs of a High-Throughput Clinical Lab
(60 min; Bioanalysis Zone recorded 研讨会; registration required)
研讨会 - - -
HybridSPE-Precipitation Technology 产品信息 483 2 T408102
Enrichment of Phospholipids in Biological Samples Using HybridSPE (Reporter 28.3) 文章 - - T210003
Minimizing Phospholipid Matrix Effects in HILIC LC-MS using HybridSPE-Precipitation Small Volume Plates (Reporter 28.2) 文章 - - T210002
Increased Bioanalytical Throughput and Recovery Utilizing HybridSPE-PPT Small Volume Plates (Reporter 28.1) 文章 - - T210001
Troubleshooting Analyte Recovery when Using HybridSPE-Precipitation Technology (Reporter 27.2) 文章 - - T209002
Increase Bioanalytical Assay Speed via Phospholipid Removal using HybridSPE™-Precipitation Technology (Reporter 26.5) 文章 - - T208005
High Recovery Method of HybridSPE®-Phospholipid for Cleanup of Biological Samples Prior to LC-MS Analysis 报告 465 22 T411056H
High Throughput Bioanalysis Utilizing Fused-Core™ P文章 and HybridSPE®-PPT Technology (HPLC 2010) 报告 494 19 T410086H
Alternative Method of Hybrid SPE Sample Preparation for High Recovery LC-MS Analysis of Pharmaceutical Compounds in Plasma 报告 712 17 T409228H
Comparison of Sample Preparation Techniques for Reduction of Matrix Interference in Biological Analysis by LC-MS-MS 报告 216 22 T408163H
Depletion of Phospholipid Matrix Interference when Dealing with Small Volume Plasma Samples 报告 587 20 T410128H
High Throughput Removal of Both Phospholipids and Proteins in Bioanalytical Sample Preparation 报告 257 20 T409038H
Impact of Ion-Suppression Due to the Presence of Phospholipids on the Enantiomeric LC-MS Analysis of Clenbuterol 报告 185 17 T409108H
Increased Bioanalytical Throughput Utilizing Fused-Core™ P文章s with Selective Phospholipid Depletion 报告 532 21 T409189H
Recovery of Pharmaceutical Drugs From Small Volume Biological Sample Using HybridSPE-PPT 96-well Plate 报告 646 22 T410048H
Selective Depletion of Phospholipids Interference Utilizing HybridSPE™-Precipitation Technology 报告 658 49 T408181H

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SelectScience奖项

HybridSPE-PPT技术被SelectScience.net
评选为最佳新分离产品!

该奖项于2009年在Pittcon颁发。(新闻稿)