代谢稳定性测定

代谢稳定性测定提供了一种方法来测量试验化合物在微粒体或肝细胞孵育中随时间消失的速率,这些数据可用于计算固有清除率。微粒体试验主要评估细胞色素P450系统(I期酶)的代谢,而肝细胞试验则可以更广泛地评估试验化合物的整体细胞代谢水平(I期和II期酶通路)。我们可提供药物、工业化学品和消费品等所有小分子制剂的代谢稳定性测定。

我们的肝细胞稳定性测定使用转基因永生化人类肝细胞系HepaRG™,该细胞系采用我们专有的CompoZr®锌指核酸酶(ZFN)技术而创建。除了新鲜的人类肝细胞,HepaRG细胞是迄今为止最具代谢活性的肝细胞系,并且在包括代谢与清除测定在内的许多功能性肝脏测定中具有用作可行替代品的潜力,且没有可用性限制和捐赠者之间的差异性等缺点。

肝脏代谢是许多药物在人和动物体内消除的主要途径。肝酶代谢药物的固有能力通常被称为“内在清除力”,它被用来确定肝脏整体清除率,同时也会考虑其他因素,如肝血流量和药物/蛋白的结合。

代谢筛选试验的数据可使客户尽早识别代谢负担,并通过结构活性关系专注于候选药物的改善。

 微粒体稳定性测定方案

 

试验系统 人肝微粒体(合并)
测试化合物浓度 3微米(或自定义)
微粒体浓度 0.5 mg/mL
时间点 十分钟,五分钟,十五分钟,三十分钟,四十五分钟,六十分钟
辅因子 还原型辅酶Ⅱ(NADPH)
重复数 3
阴性对照 溶媒(0.1%二甲基亚砜)
热灭活微粒体
阳性对照 Verapamil (快速清除)
Diazepam(低速清除)
复合要求 50µL 10mM溶液
分析方法 LC-MS/MS
数据传送 固有清除
半衰期

 

 肝细胞稳定性测定方案

 

试验系统 HepaRG肝细胞系,克隆5F
测试化合物浓度 3微米(或自定义)
时间点 十分钟,五分钟,十五分钟,三十分钟,四十五分钟,六十分钟,九十分钟,一百二十分钟
重复数 3
阴性对照 溶媒(0.1%二甲基亚砜)
阳性对照 睾丸激素试剂
乙氧基香豆素
复合要求 50µL 10mM溶液
分析方法 LC-MS/MS
数据传送 固有清除
半衰期

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 参考文献

  • Lubberstedt M等人。(2010)HepaRG人肝细胞系在体外药物代谢评估中作为原代人肝细胞替代物的效用,J 药物毒物法63,59-68
  • Obach RS(1999年)从肝微粒体固有清除率数据预测人体对29种药物的清除:体外半衰期检测法和微粒体的非特异性结合,药物代谢组27,1350-1359
  • Zanelli U等人。(2012年)冷冻保存的HepaRG细胞与冷冻保存的人肝细胞关于26种药物预测清除率的比较,药物代谢组40,104-110