癌症研究

彗星实验

彗星实验又称单细胞凝胶电泳(SCGE),是灵敏快速地定量分析单细胞DNA损伤的技术。因此,该技术也被应用于癌症研究领域,评估基因毒性和化学预防的有效性。瑞典研究者Östling 和Johansson在1984年发现了此技术。1Singh等人在1988年改进了这项技术,并称之为碱性彗星实验。2 所得的电泳图好像一个彗星,有明显的头部和尾部。头部包含完好无损的DNA,而尾部包含了损伤的(单链或者双链断裂)DNA或DNA断裂片段。尽管这项技术大多用于研究动物真核细胞,但也有报道表明该技术成功应用于植物细胞研究。

首先将单细胞包埋到玻片上的一块薄薄的琼脂凝胶里。通过裂解,将所有细胞蛋白从细胞去除。DNA在碱性/中性条件下解旋,然后经过电泳,断裂DNA片段或者损伤的DNA就会远离细胞核。用DNA特异性荧光染料(如溴化乙锭和碘化丙啶)染色后,就能读出胶上图案头部和尾部荧光量,也能看到尾部的长度。DNA偏离彗星头部的程度和损伤DNA量成正比。

单细胞凝胶电泳能够用来检测出由双链断裂、单链断裂、碱不稳定性位点、氧化碱基损伤、DNA交联DNA或蛋白质引起的DNA损伤。单细胞凝胶电泳也能用来检测活细胞DNA修复。3

彗星实验兴趣组网站包含了该技术的参考文献、实验方案,以及出售该实验图片分析软件的公司列表。

Sigma-Aldrich® 建议用于彗星实验的产品

缓冲液和裂解洗涤剂

产品名称 货号 加入购物车
杜氏磷酸缓冲盐(PBS) D8662
乙二胺四乙酸(EDTA)分子生物级溶剂 E5134
硼酸,生物技术级性能认证 B1934
Trizma® 碱,生物技术级性能认证 T6066
Triton X-100, Molecular Biology Grade T8787

 

从全血中分离淋巴细胞

产品名称 货号 加入购物车
Histopaque 1077 10771

 

电泳

产品名称 货号 加入购物车
琼脂糖凝胶,VII型,低熔点 A4018
十二烷基硫酸钠(SDS) L4390

 

DNA 染色

产品名称 货号 加入购物车
碘化丙啶 P4170
溴化乙锭 E8751
4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI) D9542


引用文献

  1. Ostling, O., and Johanson, K.J., Microelectrophoretic study of radiation-induced DNA damages in individual mammalian cells. Biochem. Biophys. Res. Commun., 123, 291-8 (1984).
  2. Singh, N.P, et al., A simple technique for quantitation of low levels of DNA damage in individual cells. Exp. Cell Res., 175, 184-91 (1988).
  3. Collins, A.R., The comet assay for DNA damage and repair (Review). Molecular Biotechnology, 26, 249-261 (2004).
  4. Comet Assay Interest Group website cometassay.com.

单细胞凝胶电泳文献资料

  1. Anderson D., et al., Comet assay responses as indicators of carcinogen exposure. (Review) Mutagenesis, 13, 539-555. (1998).
  2. Fairbairn, D.W., et al., The Comet assay: a comprehensive review. (Review) Mutat. Res., 339, 37-59 (1995).
  3. McKelvey-Martin, V.J., et al., The single cell gel electrophoresis assay (comet assay): A European review. (Review) Mutat. Res., 288, 47-63 (1993).
  4. Rojas, E., et al, Single cell gel electrophoresis. Methodology and applications. (Review) J. Chromatogr. B Biomed. Sci. Appl. 722, 225-254 (1999).
  5. Tice, R.R., et al., Single cell gel/comet assay: guidelines for in vitro and in vivo genetic toxicology testing. Environ Mol Mutagen, 35, 206-21 (2000).
  6. Comet Assay Forum website, Industrial Toxicology Research Centre, Lucknow, India.

返回页首