密度梯度介质和细胞分离

我们提供完整的密度梯度介质产品线,用于分离或提取白细胞、病毒、DNA、RNA、细胞器以及许多其他应用。我们的产品线包括用于在研究实验室中分离白细胞的Histopaque®碘化梯度介质,用于哺乳动物细胞分离的多糖介质,用于哺乳动物细胞和细胞器分离的胶体二氧化硅介质,以及用于DNA、病毒和蛋白质分离的无机盐介质。其中特色产品是畅销的ACCUSPIN System Histopaque®-1077,其采用带有多孔筛板的2室试管从全血中分离出淋巴细胞。

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ACCUSPIN™ 和 Histopaque®

使用ACCUSPIN System-Histopaque®介质进行细胞分离

  使用ACCUSPIN™ System-Histopaque®介质进行细胞分离ACCUSPIN™系统现在由经辐射灭菌的离心管组成。这些离心管经过专门设计,由多孔高密度聚乙烯屏障(“筛板”)分隔形成两个独立的室。利用这种筛板,可以将使用抗凝血剂处理过的全血添加到上层室中,从而消除与下室所含Histopaque®分离介质混合的风险。

当离心10分钟时,全血下沉并穿过筛板,与筛板下方的Histopaque®介质混合。这种密度等级介质可以将血液成分清晰分离。红细胞聚集,粒细胞变得略微高渗,它们的沉降速率增加,在ACCUSPIN 管底部形成沉淀。淋巴细胞和其他单核细胞保留在血浆与Histopaque®的分界面,易于去除。

ACCUSPIN System-Histopaque®-1077

我们的产品系列中包括特色产品ACCUSPIN-Histopaque®-1077系统,适于分离淋巴细胞和其他单核细胞

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Histopaque ®

Histopaque®碘化梯度介质

最初设计用于X射线造影应用的碘化芳族化合物克服了其他类别梯度介质的更严重痼疾。碘化梯度介质在任何浓度下的渗透压和粘度都比蔗糖低得多。Ficoll®等多糖比任何密度的蔗糖都要更粘稠。离子梯度介质,如氯化铯,比其他密度梯度介质具有更高的密度和更低的粘度。然而,由于其高渗透压和离子强度会影响渗透敏感颗粒的水合并且可破坏或以其他方式改变生物颗粒的完整性,用途受到了限制。

碘化梯度介质因其优势而被广泛应用。它们的结构通常以三碘苯甲酸为基础并连接一个亲水基团,从而增加了溶解度。

Histopaque®介质是无菌的、经内毒素测试的聚蔗糖和泛影酸钠溶液,并调整到精确的密度。这些即用型分离介质有助于从少量全血中快速回收最多的活细胞。


胶体二氧化硅介质

胶体二氧化硅介质不是真正的溶液,而是涂有聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的二氧化硅颗粒的胶体悬浮液,颗粒直径为15-30nm。最著名的胶体二氧化硅介质是Percoll®。聚乙烯吡咯烷酮使颗粒与生物材料的相互作用最小化并使胶体稳定。作为一种胶体,Percoll的渗透强度极低并且随密度变化很小。可以通过添加适量的蔗糖或缓冲溶液来调节Percoll梯度的重量摩尔渗透压浓度。当在固定角转子中离心时,Percoll梯度自动形成(摆动转子的自动形成梯度效果不佳)。通过分离沉淀,可将Percoll从悬浮液中除去。Percoll梯度介质主要用于细胞、细胞器、膜囊泡甚至一些病毒的等密度分离。主要缺点是样品颗粒尺寸必须大于胶体二氧化硅颗粒,否则二氧化硅沉淀颗粒将在样品带之前。


无机盐

由浓缩重金属盐组成的离子梯度介质几乎专门被用于核酸的异构体分离。氯化铯和硫酸铯是最广泛使用的重金属盐,梯度密度高达1.91 g/cm3。其他有用的盐包括碘化钠、溴化钠和铷盐。具有高渗透性的离子和非粘性的梯度倾斜度和形状。切记,样品的密度与样品的水合作用密切相关,而水合作用又取决于离子梯度介质的脱水能力。


非离子碘化密度梯度介质

最初设计用于X射线造影应用的碘化芳族化合物克服了其他类别梯度介质的更严重痼疾。碘化梯度介质在任何浓度下的渗透压和粘度都比蔗糖低得多。Ficoll®等多糖比任何密度的蔗糖都要更粘稠。离子梯度介质,如氯化铯,比其他密度梯度介质具有更高的密度和更低的粘度。然而,由于其高渗透压和离子强度会影响渗透敏感颗粒的水合并且可破坏或以其他方式改变生物颗粒的完整性,用途受到了限制

碘化梯度介质因其优势而被广泛应用。它们的结构通常以三碘苯甲酸为基础并连接一个亲水基团,从而增加了溶解度。第一个非离子密度梯度介质——碘海醇(如,Nycodenz和Histodenz)——出现于20世纪70年代。

在任何给定浓度下,碘海醇溶液均比其他类型的梯度介质具有更高的密度。这意味着任何特定浓度都需要较低的介质浓度,这最大限度降低了生物颗粒脱水的可能性。碘海醇是无毒的,并且不会被哺乳动物细胞代谢。


多元醇

多元醇被认为是非离子梯度介质。20世纪50年代开发的一些第一代离心技术使用蔗糖来分离细胞器。蔗糖梯度介质被广泛用于大分子的速率-区域分离以及病毒和细胞器的等密度分离。其优点是性质稳定,惰性强,成本低。缺点在于其浓缩溶液是粘稠的和高渗的。试剂级蔗糖可能被RNA酶或重金属污染,因此不适用于DNA和RNA纯化。甘油溶液的密度低于相应的蔗糖溶液。然而,与蔗糖溶液具有相同密度的甘油溶液更粘稠。甘油有助于阻止某些酶发挥活性,并且可以通过真空处理去除。


多糖

多糖能够避免使用蔗糖溶液时出现的高渗透强度问题。最常用的多糖介质是Ficoll®。Ficoll是通过蔗糖分子与表氯醇的聚合而生成,得到平均分子量为400,000的多糖。浓度低于20%(w/v)的Ficoll溶液具有1.07g/cm的密度并且被认为是渗透惰性的。其主要缺点是Ficoll溶液比同类蔗糖溶液更粘稠。

材料