检测

可实现出色荧光成像效果的Atto染料

  • 常见荧光基团的替代品
  • 活性Atto染料
  • Atto染料共轭物

Wavelengths在荧光显微镜、流式细胞术、荧光原位杂交(FISH)、荧光共振能量转移(FRET)技术、受体结合分析、和酶分析等应用中,活性荧光染料通常用于标记蛋白质、核酸和其他生物大分子。Atto染料是满足现代荧光技术需求的荧光染料系列:

  • 光稳定性和耐臭氧性增强
  • 信号寿命延长
  • 背景降噪提高了灵敏度
  • 替代普通染料的广泛选择
  • 推荐用于多重检测应用

Atto 655和Atto 647N - 耐光和耐臭氧的微阵列应用

与荧光素和花青染料相比,Atto 655 and Atto 647N 具有更加刚性的分子结构,长时间曝光下更耐光(见图1)。激发和发射波长以及发射信号衰减时间对pH和其他环境因素如温度和大气湿度相对不敏感。

 

微阵列实验中用于标记DNA的荧光染料的性质分析。

 

Atto 655

图一. 250 W卤素灯聚焦光激发下Atto 655与Cy 5光稳定性对比。

 

信号寿命长

Atto染料显现出比羰花青染料或大部分细胞和生物分子固有的自发荧光更长的荧光信号寿命 (0.6-3.8 ns)

激发波长更长背景降噪

二极管激光激发波长635 nm和红光吸收荧光染料可减少生物样本的自体荧光,以便在人类血清样品中检测到单个抗原和抗体分子可以1,2。激发红色光谱区也可减少对活细胞样本的损伤3

  • 许多Atto染料(Atto 590及以上)可使用600 nm以上波长激发。
  • 使用合适的长波长激发的Atto染料可降低样品、溶剂、玻璃或聚合物支架的自发荧光。
  •  瑞利和拉曼散射引起的背景噪音可以显著降低。
  • Atto染料对寿命较短的荧光基团的干扰较小,提高了生物分析和成像技术的整体灵敏度。

 

Atto染料 - 卓越的超分辨率显微镜工具

近年来显微镜技术飞速发展,STED、PALM、STORM可使分辨率提高至10 nm。而这需要达到严格光物理标准荧光染料。Atto染料中的Atto 488、Atto 647N和Atto 655已被证实适合PALM、dSTORM、STED等技术。点击 此处查看更多关于超分辨率染料的信息。


Atto 655 and Atto 680 --信号更强而分子失活更少

Rat Stomach Stain非荧光三重态和顺式构象会导致波动从而干扰荧光信号的输出。4Cy4、Cy5、Cy5.5或Alexa Fluor® 647等染料可能形成顺式异构体和三重态,不能用于荧光相关光谱(FCS),单分子检测(SMD)等要求严格的技术和荧光共振能量转移(FRET)的受体。5Atto 655Atto 680具有较低的系统间交叉、缺乏异构键,因此不能进行构型异构化。

  • • 由于失活染料更少,相同摩尔量的Atto 655Atto 680 的荧光信号更强。其他Atto染料也形成低三重态。

 

推荐用于荧光多重检测

 

Atto染料可将探针和生物分子缀合进行多重检测。选择发射信号分开的两种Atto染料可支持单个实验的多个激发和测量结果。

 

使用抗体Atto染料共轭物的荧光多重检测。

 

Protein 1 and Protein 2
使用两种主要抗体和两种抗-IgG-Atto染料结合物对蛋白质1和蛋白质2进行免疫印迹检测。使用FLA-3000 Fuji激光扫描仪依次进行成像,首先在532nm的激发波长下用580nm发射滤光片,然后在633nm的激发波长下用675nm发射滤光片。图像叠加使用软件工具完成。

 

常见荧光基团的替代品

 

随着广泛的选择,Atto染料可以取代常用的荧光染料。有Atto染料适用于任何常见的激发光源。

 

 

荧光基团 推荐Atto 染料替代品
Alexa Fluor 488 Atto 488
FITC Atto 488
FAM™ Atto 488
JOE™ Atto 520
TET™ Atto 520
Alexa Fluor 532 Atto 532
HEX™ Atto 532, Atto Rho6G
TAMRA™ Atto 550
Cy3 Atto 550
Cy3.5 Atto 565
ROX™ Atto 565, Atto Rho11
Alexa Fluor 594 Atto 590, Atto 594
Texas Red® Atto 590
Alexa Fluor 633 Atto 633, Atto Rho14
Cy5 Atto 647, Atto 647N, Atto 655
Alexa Fluor 647 Atto 647, Atto 647N, Atto 655
Cy5.5 Atto 680, Atto 700

 

光源 波长 (nm) 推荐Atto 染料
汞弧灯 365, 405, 436, 546 Atto 390, Atto 425, Atto 465, Atto 550, Atto 565
汞弧灯 577 Atto 590, Atto Rho101, Atto 594; Atto Rho13, Atto 610, Atto 611x
氙弧灯 Continuum and peaks >800 nm Atto 610, Atto 620, Atto 647, Atto 647N, Atto 655, Atto 680
卤素灯 Little UV and violet emission; Higher intensity toward longer wavelengths Atto 610, Atto 620, Atto 647, Atto 647N, Atto 655, Atto 680
氩离子激光器 488, 514 Atto 488, Atto 520, Atto 532, Atto 550
氩氪激光 488, 514, 647, 676 Atto 520, Atto 647, Atto 647N, Atto 655, Atto 680
氪激光 647,676 Atto 647, Atto 647N , Atto 655, Atto Oxa12, Atto 665, Atto 680, Atto 700, Atto 725, Atto 740
氦氖激光器 633 Atto Rho14, Atto 633, Atto 647, Atto 647N
Nd-NAG 激光器 532 Atto 532, Atto Rho6G, Atto 550, Atto 565, Atto Rho11, Atto Rho 12
普通二极管激光器 635, 650, 670 Atto 633, Atto 647, Atto 647N, Atto 655, Atto 680

 

活性Atto染料

强吸光度和高量子产率使Atto染料产生强烈的荧光信号。

  • 强信号强度 – 大多数Atto染料的σmax值> 100,000。
  • 最适合使用可见和近红外发射波长进行多重检测 – 低激发/发射重叠和斯托克斯移位分离。
  • Selection and Versatility – Atto染料适用于任何常见的激发光源。

Atto染料包括:

  • 用于所有常规染色的游离酸 染料。
  • 用于常见缀合方案的NHS-酯。
  • 马来酰亚胺 自发合成过程中加入以偶联含硫醇基团,如半胱氨酸残基和硫醇(-SH)标记。

查看 完整的Atto 染料产品线。

便利的Atto染料偶联物

Atto染料偶联物和试剂盒的广泛选择包括:

  • 蛋白标记试剂盒
    • Atto 488 是荧光素和Alexa Fluor 488的高级替代品,能产生更多光稳定性和更亮荧光的结合物。
    • Atto 550 是罗丹明染料,Cy3和Alexa Fluor 550的替代产品,提供更强的亮度和更高的光稳定性。
    • Atto 594 是Alexa Fluor 594和Texas Red的替代品。
    • Atto 647N 是非常高度荧光的染料,Atto 655是Cy5和Alexa Fluor 647的替代品。
    • Atto 633 是Alexa Fluor 633的替代品。
  • 用于碳水化合物结合研究的凝集素
  • 用于直接和间接ELISA、免疫印迹、免疫组织化学和其他蛋白鉴定应用的一抗和二抗。
  • 生物素和抗生物素蛋白链菌素用于抗生物素蛋白/抗生物素蛋白链菌素/生物素偶联的应用,包括ELISA、免疫组织化学、原位杂交和流式细胞术。

Fluorescent Microscopy of Human Skin Tissue
荧光显微镜检查人体皮肤组织切片(石蜡固定)真菌感染。致病真菌的碳水化合物壳聚糖特异性结合Phytolacca americana Atto 488共轭物(绿色)的凝集素。核用DAPI(蓝色)复染。图片来自J. Zbären, Inselspital, Bern。

 

p38 MAPK
组氨酸标记的p38 MAPK蛋白(500ng-25ng)在4-20%Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝胶上分离。固定和洗涤后,将凝胶在黑暗中与Ni-NTA-Atto 647N(1:1000)一起孵育。洗涤凝胶,使用633nm的FLA-3000 Fuji激光扫描器和Ni-NTA-Atto 647N(λex647nm,λem669nm)的675nm发射滤光片成像。通过荧光成像观察组氨酸标记的p38-MAPK的50ng带。

 

Atto标记磷脂

磷脂是生物膜的主要组成部分。生物膜的研究(如活细胞、质膜等细胞内膜)已成为主要的研究领域。Sigma现在提供一系列荧光标记的磷脂。所选系列染料的光学特性可使用所有常用的激发和发射滤光片设置。我们提供了多种基于甘油的磷脂,含有一种或两种脂肪酸(亲脂基团)和磷酸单酯残基(亲水基团)如1,2-二棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DPPE) (DOPE),1-棕榈酰-2-羟基 - 甘油-3-磷酸乙醇胺(PPE)和1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DMPE)。荧光基团共价连接在磷脂的亲水性头部基团上。

产品编号 描述
44039 Atto 488 DPPE
93580 Atto 532 DPPE
51016 Atto 550 DPPE
40924 Atto 594 DPPE
52816 Atto 633 DPPE
05152 Atto 647N DPPE
67335 Atto 488DOPE
40692 Atto 532 DOPE
42208 Atto 550 DOPE
05676 Atto594 DOPE
90077 Atto 633 DOPE
42247 Atto 647N DOPE
54368 Atto 488 DMPE
06713 Atto 532 DMPE
42971 Atto 550 DMPE
72567 Atto 594 DMPE
55284 Atto 633 DMPE
89522 Atto 647 DMPE
51028 Atto 488 PPE
94092 Atto 532 PPE
78998 Atto 550 PPE
19504 Atto 594 PPE
56530 Atto 633 PPE
91327 Atto 647N PPE

 

Förster共振能量转移(FRET)

作为测定分子水平距离和研究抗体/抗原对结合等动态过程的方法,FRET变得日益重要。如果两个染料分子彼此靠近,它们的跃迁偶极子可以相互作用,并且能量可以从一个染料分子(供体)转移到另一个(受体)。FRET效率实际测量能量转移速率等于供体荧光速率的距离(Forster-radius)。 本PDF PDF icon (75 KB)提供了ATTO-染料的Förster半径表。

参考文献

  1. Neuweiler, H. et al. Detection of individual p53-autoantibodies by using quenched peptide-based molecular probes. Angew. Chemie, 41, 4769-73 (2002).
  2. Sauer, M. et al., Detection and identification of individual antigen molecules in human serum with pulsed semiconductor lasers. Appl. Phys. B, 65, 427-31 (1997).
  3. Terasaki, M., and Dailey, M. E. , Confocal microscopy on living cells. In Handbook of biological confocal microscopy. Pawley, J. B., Ed. 2nd ed., pp 327-346, Plenum Press, New York (1995).
  4. Widengren, J., and Schwille, P., Characterization of photoinduced isomerization and back-isomerization of the cyanine dye Cy5 by fluorescence correlation spectroscopy. J. Phys. Chem. A, 104, 6416-28 (2000).
  5. Widengren, J. et.al., Two new concepts to measure fluorescence resonance energy transfer via fluorescence correlation spectroscopy: theory and experimental realizations. J. Phys. Chem. A, 105, 6851-66 (2001).
  6. Buschmann, V., Weston, K.D., and Sauer, M., Spectroscopic study and evaluation of red-absorbing fluorescent dyes. Bioconjugate Chem., 14, 195-204 (2003).

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