细胞培养

ECACC手册 – ECACC细胞系基础技术

1.0 ECACC及其收藏品

ECACC和人类遗传研究

欧洲细胞培养物典藏中心(ECACC)于1984年在英国索尔兹伯里CAMR成立,现已成为全球最大的动物细胞培养物收藏中心。ECACC现向全球供应认证细胞系,同时提供广泛的细胞培养服务。
虽然ECACC的核心业务为冻存、细胞建库和供应认证细胞系,但其运营内容逐渐多样化,现已经可为商业和学术领域的细胞科学家提供全面的服务。此类服务包括:专利和安全备案、微生物污染物筛查、DNA分析验证,以及全面的培训课程计划。ECACC还从事外包细胞培养流程高级开发及研究用细胞产品的生产服务。

人类遗传学收藏

ECACC快速发展的服务是人类遗传学收集。这一服务基于ECACC推出并在80年代后期进一步开发的流程,用于人类淋巴细胞的永生。这一流程主要包括:从人类外周血样品分离淋巴细胞,采用致瘤人类疱疹病毒科(EBV)处理,将其转化为类淋巴母细胞系。人类淋巴细胞的EBV转化形成一种可以连续增殖的细胞系,为无限扩增从少量血液样本分离的细胞材料提供了必要的操作方法。这种扩增的细胞储液可以作为单一供体细胞来源建库和冻存,和/或提取可无限量供应的DNA。
从1989年起,许多重大的人类遗传学研究项目,如英国糖尿病学会资助的Warren I和II期研究及MRC长期资助的人类基因组谱图计划,均依赖ECACC EBV转化服务。通过由表型明确的供体(可能含有罕见遗传性疾病)生产的一个细胞系,可为全球研究团体提供近乎无限量供应的DNA。此外,此类细胞的冻存库可在多年之后复苏,以便在技术和科学知识进步时恢复研究。
可以对从少量供体样本提取的细胞DNA进行扩增,使科学研究不再受到材料数量局限。理论上讲,通过“全基因组PCR”等生物化学方法可实现此类扩增,但截至目前尚不可行。如果之后需要,通常可采用来自高质量、活性细胞的细胞系DNA来研究其他类型的分子,如RNA或细胞蛋白。
ECACC人类遗传学收藏现包括40000多种稳定单供体淋巴细胞,其中超过50%为转化细胞系。这一典藏涵盖了700多种临床疾病,如乳腺癌、阿尔兹海默病、精神分裂症和银屑病。

ECACC基础收藏

该收藏包括大约1000种细胞系,来自于45个物种和不同的组织,涵盖了400余种人类细胞系,包括许多癌症细胞系,包括耐药性细胞系。
这些细胞可以冷冻或生长培养物的形式运输,随附规格单页及技术公告手册。可应客户要求提供批次专属的分析证书和验证记录,同时ECACC也可通过长期订单供应细胞系。
所有加入这一收藏的细胞系均要接受完整的质检和验证流程。这些步骤包括,通过组合应用细胞分离、Hoechst DNA染色和PCR,污染细菌、酵母和真菌培养手段,检测支原体水平。
采用同工酶分析确认各个存档细胞系的物种,同时通过DNA指纹识别确定细胞系变异和/或交叉污染。ECACC通常采用两种DNA指纹识别方法:多基因座方法适用于最常见的物种,而STR DNA分析则仅适用于人类细胞系。后者具有可生成数字“指纹”的优势,可以与ECACC广泛的存档图谱进行比较。所有HeLa污染细胞系均在完整的目录描述中清晰指定。

杂交瘤收藏

该搜藏包括400多种分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。分泌的抗体规格涵盖了广泛的抗原,包括细菌和病毒;主要的组织相容性复合变异;致癌基因;植物和免疫球蛋白。
ECACC可以提供此类别杂交瘤的冷冻或生长培养物。此外,ECACC还可基于定制培养基提供纯化的抗体(如果没有相关限制)。提供纯化抗体所需的成本取决于所需的杂交瘤抗体生产水平、纯化程度和数量。
所有加入该收藏的细胞系均要接受完整的质检和验证流程。这些步骤包括,通过组合应用细胞分离、Hoechst DNA染色和PCR,污染细菌、酵母和真菌培养手段,检测支原体水平。

HLA明确的人类B-类淋巴母细胞典藏

此为涵盖了350余种参考细胞系的特殊类别,来源于全球各地的实验室,用于研究HLA体系。该收藏于1996年扩展增加了来自第12届国际组织相容性工作组(IHW)的细胞系,又在今年加入了第13届IHW收集的60种细胞系,同时加入了许多来源于第10届IHW收集、近期建库的细胞系。
在此同时提供了HLA I级及II级抗原的血清学和DNA分型数据,同时提供了HLA区域内的非HLA基因的信息。这一资源同时以细胞系或DNA的形式提供。

人类随机对照典藏

此为由500种类淋巴母细胞细胞系组成的典藏,来自于父母和祖父母均出生在英国或爱尔兰的随机选择白种人血液供体。这些对照物的DNA均已经在基因组筛查计划中广泛采用。此资源将以96孔阵列提取DNA的形式提供。