定制肽合成

浓度计算

冻干肽中可能含有重量占比10%至最多70%的结晶水和盐。更多的亲水性肽相对于疏水性肽通常会含有更多的结晶水和盐。因此,通过很难通过冻干肽的重要来确定真实的肽浓度。

如果肽的序列中含有发色团(W或Y残基),肽的浓度可以这些残基的消光系数而被很简易的确定。可使用如下的步骤进行计算:

1. 使用1-cm小室在中性pH条件下280nm处的发色残基摩尔消光系数:

色氨酸 5560 AU/mmole/ml
酪氨酸 1200 AU/mmole/ml

2. 肽序列中每种发色团的消光系数通常会被认为是加成的关系,也就是说肽的整体摩尔消光系数依赖于序列中发色残基的种类和数量。

3. 计算:mg肽每ml = (A280 x DF x MW) / e

在这里A280代表1-cm小室中280nm处的溶液真实吸光值,DF代表稀释系数,MW是肽的分子量而e是每种发色团在280nm处的摩尔消光系数

4. 假设举例:在1-cm小室中稀释了50倍的序列为RRNWNQYKIQFGYSFSNSE的肽段(MW=2414)溶液在280nm的读值为0.5 AU。计算肽储存溶液中起始的肽浓度:


Mg 肽/ml    =  (0.5AU x 50 x 2414 mg/mmole)
                             [(1 x 5560) + (2 x 1200)] AU/mmole/ml 
                             =  7.58

5. 注意:

  • 任何吸收值的计算都是基于肽段不存在折叠并且发色团是被暴露出来的假设,而这通常是发生于短的可溶性肽。如果对于肽的溶解度和折叠存在疑虑,建议在变性条件下(如6M GdnHCl or 8M尿素)进行测量。很明显,除非将变性剂去除,这些肽溶液将会变得无用。
  • 如果序列中不含有色氨酸或酪氨酸,唯一实用的选择便是进行氨基酸分析了。