表观遗传学

Imprint® RNA免疫沉淀试剂盒

蛋白质- RNA的相互作用在细胞中发挥着重要的功能,包括结构功能、催化功能和调控功能。与染色质免疫沉淀(ChIP)类似,RNA免疫沉淀(RIP)可用于检测单个蛋白质与特定核酸区域的关联。RIP是一种非常强大的技术,用于检测体内单个蛋白质与特定RNA分子的关联。用高反应性的可逆交联剂甲醛处理活细胞,可使分子之间产生蛋白质-RNA交联,与体内反应十分接近。在目标蛋白质免疫沉淀和交联逆转之后,可以回收关联的RNA,并通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对其进行定性和定量。

当与合适的抗体联用时,我们的RIP试剂盒可提供RIP实验成功所需的所有试剂。该试剂盒包括两种裂解缓冲液:一种较为温和,与RNP结合不紧密;另一种则很苛刻,可极强的关联RNP。其中随附蛋白A磁珠,用于收集免疫沉淀物,方便洗涤。该试剂盒还包括用于阴性对照实验的兔和小鼠IgG,以及一种兔抗鼠的桥接抗体,用于将小鼠单克隆一抗有效结合至磁珠上的蛋白A;其中还含有蛋白酶和核糖核酸酶抑制剂,可保护RIP实验过程中RNP不被降解。

 

 产品特点与优点

  • 更高结合能力的Xtra蛋白A磁珠
  • 细胞裂解和免疫沉淀的分步实验方案
  • 包含RNA酶抑制剂和无RNA酶试剂,以保持RNA的完整
  • 内附阴性对照,且包含抗体

 

 工作流程

 应用数据

图1

 

从HeLa细胞(每IP细胞当量为0.75×106)制备RIP裂解液,分别使用1μg的正常兔IgG或抗SNRP70抗体,通过Imprint RNA免疫沉淀试剂盒进行沉淀。使用对照引物U1snRNA ,通过qPCR验证SNRP70关联RNA的免疫沉淀产物。

 

图2

 

从HeLa细胞(每IP细胞当量为0.75×106)制备RIP裂解液,分别使用1μg的正常鼠IgG或抗PABPC1抗体(与来自兔的抗鼠抗体联用),通过Imprint RNA免疫沉淀试剂盒进行沉淀。使用对照引物Actin B ,通过qPCR验证PABP关联RNA的免疫沉淀产物。

 

图3

 

从HeLa细胞(每IP细胞当量为2.0×106)制备RIP裂解液,分别使用1μg的正常兔IgG或抗HUR抗体,通过Imprint RNA免疫沉淀试剂盒进行沉淀。使用对照引物Actin B,通过qPCR验证HUR关联RNA的免疫沉淀产物。

 

图4

 

从HeLa细胞(每IP细胞当量为0.5×106或1.7 x 106)制备RIP裂解液,分别使用2.5μg的正常兔IgG或抗HUR抗体,通过Imprint RNA免疫沉淀试剂盒进行沉淀。使用对照引物 Actin B和JUN,通过qPCR验证HUR靶向/非靶向关联RNA的免疫沉淀产物。

 

RIP试剂盒组分和储存

RIP试剂盒在两种不同温度下运送。第一部分用湿冰运输,第二部分用干冰运输。储存温度见下表所示。

  Imprint RNA免疫沉淀试剂盒
第一部分-产品目录号RIPPART1
2-8°C
B0314 温和裂解缓冲液 1 x 3 mL
B0439 苛刻裂解缓冲液 1 x 3 mL
B0564 洗涤缓冲液 2 x 75 mL
B0689 蛋白A磁珠* 1 x 300 µL
I5381 鼠血清来源IgG 1 x 1 mg
I5006 兔血清来源IgG 1 x 1 mg


 
  Imprint RNA免疫沉淀试剂盒
第二部分 – 货号RIPPART2
-20°C
R1158 核糖核酸酶抑制剂 1 x 2.5 KU
P8340 蛋白酶抑制剂混合物 2 x 125 µL
M7023 兔源抗小鼠IgG抗体 1 x 60 µL

 


 订购信息

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RIP-12Rxn ImprintR RNA免疫沉淀试剂盒(包含阴性对照) 12次反应