shRNA

MISSION®体内shRNA和慢病毒解决方案

针对您体内研究的慢病毒产品!

Sigma-Aldrich是DNA或慢病毒形式的RNAi联盟(TRC)shRNA文库克隆的独家经销商。一种产品很少能适合所有研究。您的体内研究的需求是独一无二的,因此Sigma®提供了多种可配置的选项,可根据您的研究量身定制。可用选项包括:

  • 替代载体
  • 106至109 TU/ml的滴度
  • 多种体积

所有定制需求都会被考虑——想了解更多详情,请访问我们的定制服务页面。


体内使用MISSION慢病毒简介

MISSION体内慢病毒旨在解决将RNAi研究扩展到体内系统的挑战。通过单次高滴度注射或连续低剂量给药在体内实现了慢病毒递送的shRNA。MISSION体内慢病毒适用于在动物体内使用多种递送途径进行RNAi研究。

Labcoat Image可立即使用

  • 优质的体内级慢病毒,适用于单次或重复注射

没观察到毒性

  • 注射最大病毒载量的动物没有表现出VSV-G包膜所致的影响或病毒毒性

用途得到验证*

  • Sigma慢病毒制剂和MISSION TRC shRNA的体内敲除功效已在顶级期刊中得到证实

专为您的需求而设计

* 重要的是使用冗余的shRNA和适当的 对照,确保产生的结果能反映真实的生物学发现,并减少潜在的脱靶效应


MISSION体内慢病毒的生物分布

MISSION慢病毒可以在体内通过多种递送途径转导多种器官和组织。图1显示了在小鼠体内使用表达远红荧光蛋白的慢病毒进行原理验证实验的结果。

 

Time Specific Expression of fRFP Image

图1. MISSION慢病毒可以在体内转导多种组织。*
通过单次快速浓注高滴度慢病毒来递送远红荧光蛋白 (TagFP635™)。测试的递送途径是:肌内 (IM)/皮下 (SUBQ)、腹膜内 (IP) 和静脉内 (IV)。数值表示为相对于未转导对照小鼠的荧光强度的倍数变化。

*数据由美国圣母大学提供。

瘤内注射MISSION体内慢病毒

MISSION慢病毒在直接瘤内注射中取得了成功。通过肋腹部皮下注射给p55敲除小鼠注射5×105 LLC-1(小鼠Lewis肺癌)细胞。随后的肿瘤与20 μL 1.9×107 TU/ml表达TurboGFPTM的慢病毒(货号SHC003V)一起注射,每天两次,持续5天。最后一次注射5天后,对肿瘤进行活检,用TO-PRO®-3(核染色剂)染色并成像,见图2。

 

Intratumoral Injections Image
图2. MISSION慢病毒可以用于直接瘤内注射。*
A行 显示TurboGFP™(绿色)细胞的表达。注射tGFP慢病毒的细胞表达tGFP,而未注射的细胞不表达tGFP。
B行 用核染色剂(红色)覆盖tGFP表达(绿色)。注射tGFP慢病毒的细胞除核染色外还表达tGFP。未注射的细胞不表达tGFP,仅核染色。

*数据由圣伊丽莎白医学中心的Goukassian, D.和Sasi, S.P.提供(结果未发表)。

肌内注射MISSION体内shRNA

直接肌内注射MISSION shRNA可敲除Smad3的表达(Carlson等,2008)。由于内源性Smad3和Notch表达失衡,与年轻的肌肉卫星细胞相比,较老的肌肉卫星细胞的肌肉再生能力降低。本文作者假设这种失衡是由年老肌肉卫星细胞中Smad3表达增加所致。将Smad3 shRNA肌内注射到损伤的肌肉组织中,注射五天后测定,较老的肌肉组织能够恢复再生能力。作者发现内源性Smad3和活性Notch之间的平衡可控制肌肉卫星细胞的再生能力。

图3显示了年轻和年老肌肉组织的苏木精和伊红染色以及相应的Hoechst染色(蓝色)和肌球蛋白重链抗体染色(绿色)。偏移图像中显示了BrdU染色和eMyHC抗体染色。


当通过多剂量(50,000 TU/注射)慢病毒将shRNA携带到Smad3基因对Smad3进行沉默时,相对于年轻肌肉 (B),较老的肌肉能够恢复其再生能力 (A)。任何计划适当的体内实验通常包括非靶标shRNA对照、SHC002V (D)和未转导的对照 (C),以证明所用shRNA的特异性。通过对肌球蛋白重链进行IHC染色(eMyHC,绿色)来显示再生能力。eMyHC是一种抗体,能够在肌纤维发育和再生过程中帮助表征肌球蛋白重链。

*Carlson, M.E., et al., Nature 454, 528-534 (2008).

使用MISSION慢病毒的异种移植模型

MISSION慢病毒在异种移植小鼠模型中取得了成功。将HeLa细胞用远红荧光蛋白 (TagFP635) 慢病毒转导并皮下注射到裸鼠体内。图4显示了在小鼠体内表达远红荧光蛋白的所得HeLa细胞肿瘤的强烈局部荧光。

 

图4.使用MISSION体内慢病毒的异种移植模型*
随后在活小鼠体内表达远红荧光蛋白的HeLa肿瘤的体内荧光成像。

*图片由美国圣母大学提供。

精选体内慢病毒应用的参考文献

  • Wiederschain, D., et al., Single-vector inducible lentiviral RNAi system for oncology target validation. Cell Cycle 8, 498-504 (2009). Pubmed ID 19177017.
  • Krishnamachary, B., et al., Noninvasive Detection of Lentiviral-Mediated Choline Kinase Targeting in a Human Breast Cancer Xenograft. Cancer Res. 69, 3464-71 (2009). Pubmed ID 19336572
  • Carlson, M.E., et al., Imbalance between pSmad3 and Notch induces CDK inhibitors in old muscle stem cells. Nature 454, 528-534 (2008). Pubmed ID 18552838
  • Croyle, M.A., et al., PEGylation of a vesicular stomatitis virus G pseudotyped lentivirus vector prevents inactivation in serum. J. Virol. 78, 912-921 (2004). Pubmed ID 14694122
  • Pan, D., et al., Biodistribution and toxicity studies of VSVG-pseudotyped lentiviral vector after intravenous administration in mice with the observation of in vivo transduction of bone marrow. Mol. Ther. 6, 19-29 (2002). Pubmed ID 12095299

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MISSION为Sigma-Aldrich Co的注册商标。LLC 标签许可证。TO-PRO为Molecular Probes, Inc的注册商标。TurboGFP和TagFP635为Evrogen Co的注册商标。