shRNA

诱导型shRNA载体

严格的调控会导致很大程度的基因沉默

 

 询价


     

背景

RNAi联盟(TRC)的最新进展

组成型表达的shRNA可满足大多数RNAi需求,但进一步表征通常需要调节基因表达的能力。在研究必需基因和致死基因时,调控表达尤为重要。Sigma能够提供IPTG诱导型shRNA载体,这是我们与TRC持续合作的最新进展。相信MISSION®定制服务能够创造出适合您的研究的完美克隆。

注意:在开始IPTG诱导型shRNA实验之前,使用MISSION pLKO组成型shRNA载体对shRNA克隆进行初步实验很重要。在进入IPTG诱导型shRNA系统之前,应通过qRT-PCR在mRNA水平至少检测到70%的敲除。

     

订购和服务信息

     

货号 说明
SHC314 MISSION 1X LacO诱导型TurboGFP™ shRNA对照质粒DNA
SHC314V MISSION 1X LacO诱导型TurboGFP™ shRNA对照转导颗粒
SHC334 MISSION 3X LacO诱导型TurboGFP™ shRNA对照质粒DNA
SHC334V MISSION 3X LacO诱导型TurboGFP™ shRNA对照转导颗粒
SHC317 MISSION 1X LacO诱导型Luciferase shRNA对照质粒DNA
SHC317V MISSION 1X LacO诱导型Luciferase shRNA对照转导颗粒
SHC337 MISSION 3X LacO诱导型Luciferase shRNA对照质粒DNA
SHC337V MISSION 3X LacO诱导型Luciferase shRNA对照转导颗粒
SHC312 MISSION 1X LacO诱导型Non-Target shRNA对照质粒DNA
SHC312V MISSION 1X LacO诱导型Non-Target shRNA对照转导颗粒
SHC332 MISSION 3X LacO诱导型Non-Target shRNA对照质粒DNA
SHC332V MISSION 3X LacO诱导型Non-Target shRNA对照转导颗粒

     

标准产品线

我们的服务包括:shRNA设计、克隆、序列验证、DNA定量和滴度测定(订购慢病毒时)。通常在下单后4-6周内发货。定制的滴度、体积和包装均可根据要求提供。

上表中的对照病毒是制备好并保存在架子上的。下单后即可发货。

标准DNA订单接受总共1 µg的纯化质粒DNA,其在Tris-EDTA (TE)缓冲液中以20 ng/µl浓度存在。

标准慢病毒订单接受200 µl(4 x 50 µl等份),最小滴度为1 x 106 TU/ml。我们通常以高于1 x 107 TU/ml的滴度输送病毒。

 

为什么使用IPTG诱导型shRNA?

  • 时间控制的基因沉默可用于致死基因敲低
  • 经证明可在体内和体外起作用
  • 可用于有效诱导型敲低的单一载体系统
  • IPTG诱导快速响应
  • 严格调控和高度诱导shRNA表达
  • 可用于广泛使用的TRC载体主干
  • 慢病毒递送增加了可靶向细胞系的数量
  • 由TRC在博德研究所开发

 

定制您的规格

载体:1x LacO & 3x LacO

Titer: 1x106 – 1x109 TU/mL

滴度:1x106 – 1x109 TU/mL

体积:200 µL – 10 mL

序列:选择任何TRC克隆或定制序列

订购

订单和查询可以通过以下三种方式之一进行处理:

  1. 联系您当地的销售代表
  2. 发送电子邮件至MISSIONRNAi@sial.com
  3. 填写在线申请表

 

技术通报

技术通报
(294 Kb PDF)

 

     

特性

     

重新设计了pLKO载体以包含LacI(阻遏子)和经修饰的具有LacO(操纵子)序列的人类U6 shRNA启动子。在不存在乳糖类似物IPTG(异丙基-β-D-硫代-半乳糖苷)的情况下,LacI与LacO结合,防止shRNA表达。当存在IPTG时,变构LacI阻遏子改变构象,从lacO修饰的人类U6启动子释放自身,随后允许表达shRNA。

我们很高兴能为您的研究提供两种不同的IPTG诱导型载体。优选的诱导型载体pLKO_IPTG_3xLacO含有三个lac操纵子序列(U6启动子中的两个和启动子的一个3'),可提供严格的调控和很大程度的基因沉默。然而,pLKO_IPTG_1xLacO载体在U6启动子中含有单个lac操纵子序列,这对于shRNA表达具有优势,但是在未诱导时对启动子的控制更松。

下面的数据显示了与等效本构设计相比1xLacO和3xLacO载体的一般性能。请选择最适合您的应用的载体。

 

IPTG和TET诱导型shRNA介导的敲低比较。分别用基于IPTG或TET的诱导系统靶向敲低p53和Rad51。如图所示,在优化所使用的病毒MOI和shRNA序列之后,使用不同浓度的IPTG或DOX绘制每个靶标的诱导曲线。shRNA表达的诱导进行48小时,然后从处理的细胞中收集总RNA,并通过qRT-PCR测量靶标的表达。显示的表达百分比相对于未处理的野生型细胞(对于p53是HepG2,对于Rad51是A549),并归一化为亲环蛋白A的表达。当培养基中不存在IPTG时,并未观察到敲除,但是极低水平的DOX能够诱导shRNA介导的Rad51敲除。此外,在用不同浓度的IPTG诱导后,观察到更大的动态范围和更高的整体敲除,这表明相对于TET诱导的Rad51敲除,IPTG诱导具有更高的灵敏度。

 

     

现有诱导型shRNA参考文献

 

关于载体序列和定制克隆载体图,请访问我们的载体图谱页面。

 

IPTG诱导型shRNA参考文献

标题

作者/期刊

摘要

FOXO3a Is A Major Target Of Inactivation By PI3K/AKT Signaling In Aggressive Neuroblastoma

Santo, E.E., et al.
Cancer Res. 2013 Feb 1. [Epub ahead of print]

摘要

Shifting the Paradigm: The Putative Mitochondrial Protein ABCB6 Resides in the Lysosomes of Cells and in the Plasma Membrane of Erythrocytes

Kiss, K., et al.
PLoS One. 2012; 7(5)

摘要