shRNA

TRC设计及pLKO.1载体FAQ

MISSION shRNA

为什么使用U6启动子?
克隆shRNA序列应选择什么样的限制位点?
pLKO.1是否含有WPRE?
克隆DNA的诊断消化推荐使用什么限制性酶?
插入可以pLKO.1处理?
如果我订购了TRC1.5克隆和对照,它们会和TRC1兼容吗?
我之前一直订购的是TRC1产品。现在我注意到仅有TRC1.5产品可以提供。这和我之前订购的产品一样吗?
TRC1和TRC1.5克隆有何不同?

pLKO.1 puro 序列

MISSION shRNA 载体图谱

为什么使用U6启动子?
人类U6启动子(一种pol III启动子)可用于启动shRNA发卡结构的表达。pol III启动子因其精准的转录起始和终止可实现最佳的shRNA表达。TRC对于U6的选择是基于与其他高效pol III启动子(H1)的比较实验数据中显示出的极佳效率。

克隆shRNA序列应选择什么样的限制位点?
shRNA将会被克隆至AgeI和EcoRI位点中间。单独的发卡序列也可在我们的网站上查询得到。

pLKO.1是否含有WPRE?
不,TRC1载体pLKO.1-puro不含有WPRE(Woodchuck转录后调节元件)。它在TRC2载体TRC2-pLKO-puro中含有。WPRE因其可增强转基因的转录而闻名。


克隆DNA的诊断消化推荐使用什么限制性酶?
We recommend Pvu我们推荐Pvu II。使用Pvu II进行的限制性消化将会产生三条带。然而发卡插入的克隆如果带有额外Pvu II位点,则会产生四条带:2513 bp, 2325 bp, 1478 bp和776 bp。

Pvu II消化的shRNA载体将会产生的条带大小为:3803 bp, 2513 bp和776 bp。


pLKO.1可插入多大的片段?
pLKO.1插入的片段越大,产生的慢病毒功能性滴度就会越低。我们通常建议插入的总片段大小低于9kb。

如果我订购了TRC1.5克隆和对照,它们会和TRC1兼容吗?

可以。TRC1.5具有与TRC1相同的载体骨架。
我之前一直订购的是TRC1产品。现在我注意到仅有TRC1.5产品可以提供。这和我之前订购的产品一样吗?

TRC1和TRC1.5克隆有何不同?
他们并没有什么不同。TRC1.5具有和TRC1相同的载体骨架。TRC1.5具有与之前你所信赖的相同的载体骨架,只是范围更广泛了。

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