功能基因组学和RNAi

载体图谱

MISSION RNAi

MISSION研发团队与RNAi联盟(TRC)科学家合作开发了一系列载体,让您可以成功实施RNAi实验。这类基础载体pLKO.1-puro在TRC旗下的博德研究所(Broad Institute)开发1。我们为TRC的关键对照实验提供了多种载体集,同时为定制shRNA生产提供了各种载体。本页含有有关这些载体的信息。

跳转至:

TRC1.5 载体:pLKO.1-puro
TRC1.5 对照载体
TRC1.5 替代载体骨架
TRC2 载体: TRC2-pLKO-puro
诱导型shRNA载体
慢病毒包装载体
参考文献

 

 TRC1.5载体: pLKO.1-puro载体及用途

TRC1.5 克隆与TRC1克隆具有完全相同的载体骨架

pLKO.1-puro载体功能的特点允许瞬时或稳定转染shRNA及制备慢病毒微粒1。通过嘌呤霉素筛选标记可筛选稳定的基因沉默,通过共转染兼容的包装质粒可在包装细胞(HEK293T)内产生自失活复制缺陷的病毒微粒。2,3 TRC1.5文库是Sigma生命科学业务部独有的,含有近200000种克隆,其中经过验证的克隆超过49000种。TRC1.5包括了TRC1之中的所有内容,同时加入39212种靶向2661种人类新基因和2395种小鼠基因的克隆。和基于腺病毒或小鼠的MMLV或MSCV逆转录病毒系统不同,基于慢病毒的微粒具有高效的感染效率并可将特定的shRNA结构整合到分化和非分裂的细胞中,如神经元和树突细胞,克服了使用这类细胞系时的转染和整合率低难题。与siRNA及其他基于载体的系统相比,pLKO.1-puro为复杂或敏感细胞系(未在分裂的细胞或原代细胞)的长期敲低和表型观测提供了解决方案,是一种经济可持续的资源。

插入shRNA片段后,pLKO.1-puro质粒的长度为7,086 bp,如下方的载体图谱所示。未插入shRNA片段的情况下,pLKO.1-puro 载体长度为7,052 bp。此处提供的序列文件为未插入shRNA的pLKO.1-puro 载体(7,052 bp)。

 

pLKO.1-puro序列(不含shRNA插入片段,7052bp)(8 Kb文本文件)

TRC1.5 载体图谱 (pLKO.1-puro)
pLKO.1-puro Vector Map

TRC1.5 载体描述及特性

名称 描述
cppt 中央聚嘌呤序列
hPGK 人类磷酸甘油激酶真核启动子
puroR 用于哺乳动物筛选的嘌呤霉素耐受基因
SIN/LTR 3'自失活长末端重复序列
f1 ori f1 复制起点
ampR 用于细菌筛选的氨苄青霉素耐受性基因
pUC ori pUC 复制起点
5' LTR 5'长末端重复序列
Psi RNA 包装信号
RRE Rev 响应元件

 TRC1.5 对照载体

Sigma提供了一系列执行最严苛、内容最丰富的shRNA实验可能需要的对照物。更多信息请见shRNA对照页面
 

产品 用途 载体图谱 载体文件
SHC001 空白载体(不含shRNA插入片段)对照 SHC001
(186 Kb PDF)
SHC001
(8 Kb 文本文件)
SHC002 非哺乳动物shRNA对照 SHC002
(189 Kb PDF)
SHC002
(8 Kb文本文件)
SHC003 TurboGFP 对照 SHC003
(295 Kb PDF)
SHC003
(9 Kb 文本文件)
SHC004 TurboGFP shRNA Control SHC004
(189 Kb PDF)
SHC004
(8 Kb 文本文件)
SHC005 eGFP shRNA 对照 SHC005
(187 Kb PDF)
SHC005
(8 Kb 文本文件)
SHC007 荧光素酶 shRNA 对照 SHC007
(188 Kb PDF)
SHC007
(8 Kb 文本文件)
SHC008 B2M shRNA 对照 SHC008
(190 Kb PDF)
SHC008
(8 Kb 文本文件)
SHC009 ARHGDIA shRNA 对照 SHC009
(188 Kb PDF)
SHC009
(8 Kb 文本文件)
SHC010 CMV-TagCFP™ 对照 SHC010
(186 Kb PDF)
SHC010
(8 Kb 文本文件)
SHC011 CMV-TagYFP™ 对照 SHC011
(185 Kb PDF)
SHC011
(8 Kb 文本文件)
SHC012 CMV-TagRFP™ 对照 SHC012
(183 Kb PDF)
SHC012
(8 Kb 文本文件)
SHC013 CMV-TagFP635™ 对照 SHC013
(186 Kb PDF)
SHC013
(8 Kb 文本文件)
SHC014 UbC-TurboGFP™ 对照 SHC014
(186 Kb PDF)
SHC014
(9 Kb 文本文件)
SHC015 UbC-TagFP635™ 对照 SHC015
(186 Kb PDF)
SHC015
(9 Kb 文本文件)
SHC016 非靶向 shRNA 对照 SHC016
(236 Kb PDF)
SHC016
(7 Kb 文本文件)

 TRC1.5 替代载体骨架

在我们的标准shRNA产品线中,Sigma还提供了一系列替代载体骨架。通过我们的定制MISSION shRNA订购界面,可以在质粒DNA或慢病毒转导微粒的详情页面,直接订购这些载体骨架上的 TRC shRNA。如需定制发卡结构,请访问我们的定制克隆页面了解订购详情。
 

产品 用途 载体图谱 载体文件
pLKO.1-CMV-Neo 替代载体骨架骨架载体 pLKO.1-CMV-Neo
(30 Kb PDF)
pLKO.1-CMV-Neo
(8 Kb 文本文件)
pLKO.1-Neo 替代载体骨架 pLKO.1-Neo
(30 Kb PDF)
pLKO.1-Neo
(8 Kb 文本文件)
pLKO.1-CMV-tGFP 替代载体骨架 pLKO.1-CMV-tGFP
(179 Kb PDF)
pLKO.1-CMV-tGFP
(8 Kb 文本文件)
pLKO.1-Neo-CMV-tGFP 替代载体骨架 pLKO.1-Neo-CMV-tGFP
(193 Kb PDF)
pLKO.1-Neo-CMV-tGFP
(8 Kb 文本文件)
pLKO.1-puro-CMV-tGFP 替代载体骨架 pLKO.1-puro-CMV-tGFP
(32 Kb PDF)
pLKO.1-puro-CMV-tGFP
(9 Kb 文本文件)

 

Sigma also offers several Alternate vector backbones with fluorescent proteins or the UbC promoter. These constructs are available only as custom options. Please visit our custom cloning page for details on ordering.
 

产品 用途 载体图谱 载体文件
pLKO.1-puro-CMV-TagCFP™ 替代载体骨架 pLKO.1-puro-CMV-TagCFP
(32 Kb PDF)
pLKO.1-puro-CMV-TagCFP
(8 Kb 文本文件)
pLKO.1-puro-CMV-TagYFP™ 替代载体骨架 pLKO.1-puro-CMV-TagYFP
(187 Kb PDF)
pLKO.1-puro-CMV-TagYFP
(8 Kb 文本文件)
pLKO.1-puro-CMV-TagRFP™ 替代载体骨架 pLKO.1-puro-CMV-TagRFP
(188 Kb PDF)
pLKO.1-puro-CMV-TagRFP
(8 Kb 文本文件)
pLKO.1-puro-CMV-TagFP635™ 替代载体骨架 pLKO.1-puro-CMV-TagFP635
(188 Kb PDF)
pLKO.1-puro-CMV-TagFP635
(8 Kb 文本文件)
pLKO.1-puro-UbC-TurboGFP™ 替代载体骨架 pLKO.1-puro-UbC-TurboGFP
(188 Kb PDF)
pLKO.1-puro-UbC-TurboGFP
(9 Kb 文本文件)
pLKO.1-puro-UbC-TagFP635™ 替代载体骨架 pLKO.1-puro-UbC-TagFP635
(189 Kb PDF)
pLKO.1-puro-UbC-TagFP635
(9 Kb 文本文件)

 TRC2 载体: TRC2-pLKO-puro 载体及用途

TRC2-pLKO-puro载体也可用于瞬时或稳定转染shRNA及生产慢病毒微粒。TRC1.5 载体和TRC2载体唯一的区别在于加入了WPRE(美洲旱獭肝炎病毒转录后调控元件)。4这一处理增强了慢病毒递送的转基因的表达。5采用TRC1.5,可采用嘌呤霉素选择性标记物实现稳定的基因沉默。通过与相容的包装质粒共转染,可在包装细胞(HEK293T)内生成自灭活复制缺陷病毒微粒。TRC2-pLKO-puro为复杂或敏感细胞系的长期敲低、表型观测和转化,以及转基因的增强表达,提供了解决方案。

插入shRNA片段后,TRC2-pLKO-puro质粒的长度为7,518 bp,如下方的载体图谱所示。未插入shRNA片段的情况下,TRC2-pLKO-puro 载体长度为7,484 bp。此处提供的序列文件为未插入shRNA的TRC2-pLKO-puro载体(7,484 bp)。

TRC2-pLKO-puro序列(不含shRNA插入片段,7484bp) (8 Kb文本文件)

TRC2 载体图谱 (TRC2-pLKO-puro)

 

TRC2 Vector 载体描述及特性
 

名称 描述
cppt 中央聚嘌呤序列
hPGK 人类磷酸甘油激酶真核启动子
puroR 用于哺乳动物筛选的嘌呤霉素耐受基因
WPRE 美洲旱獭肝炎病毒转录后调控元件
SIN/LTR 3' 自灭活长末端重复序列
f1 ori f1 复制起点
ampR 用于细菌筛选的氨苄青霉素耐受性基因
pUC ori pUC 复制起点
5' LTR 5' 长末端重复序列
Psi RNA 包装信号
RRE Rev响应元件


TRC2 对照载体
 

产品 用途 载体图谱 载体文件
SHC201 空白TRC2载体(不含shRNA插入片段)对照 SHC201
(222 Kb PDF)
SHC201
(7 Kb文本文件)
SHC202 非靶向shRNA对照 SHC202
(226 Kb PDF)
SHC202
(7 Kb文本文件)
SHC203 TurboGFP 对照 SHC203
(234 Kb PDF)
SHC203
(8 Kb文本文件)
SHC204 TurboGFP shRNA 对照 SHC204
(225 Kb PDF)
SHC204
(7 Kb文本文件)

Please note: At this time, there are no alternate vector backbones available for TRC2.

 诱导型shRNA载体

pLKO载体经过重新设计,包含了LacI(阻遏蛋白)和含有LacO(操作子)序列的改良人U6 shRNA启动子。在缺少IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)的情况下,乳糖模拟物LacI可以与LacO结合,避免shRNA过表达。在存在IPTG的情况下,变构LacI阻遏蛋白改变了构象,从LacO修饰的人U6启动子释放出来,进而允许shRNA表达。

很荣幸能够为您的研究提供两种不同的IPTG诱导型载体。首选的诱导型载体pLKO-puro-IPTG-3xLacO (399 KB PDF)含有三个lac操纵子序列(两个位于U6启动子内,一个位于启动子的3’端),可实现严格的调控和良好的基因沉默效果。而pLKO-puro-IPTG-1xLacO pLKO-puro-IPTG-1xLacO (95 Kb PDF)载体在U6启动子上含有单个lac操纵子序列,可实现shRNA表达优势,但在未诱导的情况下控制较为宽松。

 

产品 目的 载体图谱 载体文件
pLKO-puro-IPTG-1xLacO 替代载体骨架 pLKO-puro-IPTG-1xLacO
(95 Kb PDF)
pLKO-puro-IPTG-1xLacO
(8 Kb 文本文件)
pLKO-puro-IPTG-3xLacO 替代载体骨架 pLKO-puro-IPTG-3xLacO
(399 KB PDF)
pLKO-puro-IPTG-3xLacO
(8 Kb 文本文件)

 慢病毒包装载体

最后,针对希望包装自己的慢病毒的客户,我们提供了优化的包装混合物。更多信息请访问 慢病毒包装混合物页面
 

产品 用途 载体图谱 载体文件
SHP001
pMISSIONgagpol
包装载体1 pMISSIONgagpol
(192 Kb PDF)
pMISSIONgagpol
(13 Kb 文本文件)
SHP001
pMISSIONvsvg
包装载体2 pMISSIONvsvg
(158 Kb PDF)
pMISSIONvsvg
(9 Kb 文本文件)

参考文件

  1. Stewart, S. A. et al. Lentivirus-delivered stable gene silencing by RNAi in primary cells. RNA 2003, 9, 493–501.
  2. Zufferey, R. et al. Multiply attenuated lentiviral vector achieves efficient gene delivery in vivo. Nat. Biotechnol 1997, 15, 871–85.
  3. Zufferey, R. et al. Self-inactivating lentivirus vector for safe and efficient in vivo gene delivery. J. Virol. 1998, 72, 9873–80.
  4. Donello J. E. et al. Woodchuck hepatitis virus contains a tripartite posttranscriptional regulatory element. J. Virol. 1998, 72, 5085-92.
  5. Zufferey, R. et al. Woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element enhances expression of transgenes delivered by retroviral vectors. J. Virol. 1999, 73, 2886-92.

联系我们

如就文库、定价和报价及其他问题存在疑问,欢迎电邮垂询:MISSIONRNAi@sial.com.

MISSION为Sigma-Aldrich Co.LLC的注册商标。标签许可证.
TurboGFP、TagCFP、TagYFP、TagRFP和TagFP635为Evrogen Co的注释商标。

返回页首
RNAi主页