一般siRNA常见问题

什么是siRNA?

小型干扰RNA(siRNA)是一类通过诱导RNA诱导沉默复合物(RISC)切割信使RNA(mRNA)来沉默基因表达的小双链RNA分子,
 

我的siRNA平均分子量是多少?

用于siRNA的21bp双链体的平均分子量约为13,300g/mol。实际分子量在质量保证文件中以g/mol列出。
 

siRNA双链体的推荐储存条件是什么?

干燥的siRNAs在环境温度下运输。收到后,重新配制前,在-20°C条件下保存。若要延长重组产品的储存时间,请等分试样储存在-20°C的条件下。不建议反复冻融或存放在“无霜”冰柜中。
 

siRNA稳定多久?

我们的研发对几种siRNA双链体进行了加速稳定性研究。他们发现保存在-20℃条件下三年的干siRNA双链体是稳定的。在室温下保存的干siRNA双链体在两年后仅表现出轻微降解的迹象。我们的研究确实看到了一些序列特异性的稳定性差异——只有某些序列在两年时间里表现出些许的退化迹象。这只是双链siRNA的代表。
 

我可以冻融重组siRNA多少次?

不建议反复冻融或存放在“无霜”冰柜中。siRNA在-20℃的非无霜冰箱中可能保存长达六个月,我们建议溶液冷冻/解冻不超过3-5次。以冻干形式,双链体在-20℃条件下稳定的时间很长。
 

我的siRNAs需要什么级别的纯化?

在绝大多数情况下,脱盐(DST)siRNA双链体将足以满足您的需求。纯化过程基本上为全长序列富集寡核苷酸。我们的siRNAs由单链合成的RNA分子双链结合在一起,这些分子被单独“脱盐”以去除合成反应的副产物,进行质量控制和定量。分离链的双链自我选择全长寡核苷酸,因为这个过程依赖于自身互补链之间的完美匹配。根据制造地点的不同,双链体本身可以分别在非变性PAGE凝胶上运行以检查其整体完整性。如有其他问题,请与技术服务部门联系。
 

你们提供GMP的siRNA吗?

近期内没有
 

我们如何退火siRNA形成双链体?

我们用的是Tuschl协议。它已经在内部得到验证。对于退火,我们在退火缓冲液(100mM乙酸钾,pH 7.4的30mM HEPES-KOH,2mM乙酸镁)中孵育20μM单链21-nt RNA,90℃孵育1分钟,然后37℃孵育1小时。该溶液可在-20℃冷冻保存,冻融多次。如果要求更高浓度的siRNA,每条链我们将使用超过20μM。
 

为什么我计算的溶液中siRNA的量与质量保证文件上的不同?

为什么会出现这种情况有多种原因:1.样品可能不是均匀混合的。2.定量siRNA的仪器差异可能导致表观值的差异。推荐使用双光束紫外可见分光光度计。3.样品浓度可能过高。吸光度值在0.15~0.6之间最为准确,在标准曲线的线性范围内。4.样品可能过于稀释。用小体积(1-1.5μL)的稀释度进行测量更容易发生变异。
 

两周前我们收到了siRNAs,它现在就在我的工作台上。我的siRNA还可以吗?

是的。样品以干燥颗粒的形式运输,在室温下稳定2-4周。收到后,我们建议将siRNAs保存在-20ºC或-70ºC到-80ºC之间。