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糜蛋白酶

 物理性质

分子量:25 kDa1 (牛)

pI: 8.752(牛)

消光系数:E1%= 20.4 (280nm)

糜蛋白酶在胰腺的腺泡细胞中,作为无活性的前体——糜蛋白酶原产生。α-糜蛋白酶是由其酶原——糜蛋白酶原A产生的活性酶的主要形式。

在体内,由于酶原被胰蛋白酶和自身水解的水解速率不同产生大量的α,π,δ和γ变体。3α-糜蛋白酶是由241个氨基酸残基组成的肽酶S1家族的丝氨酸蛋白酶。 该分子有三条肽链:13个残基的A链,131个残基的B链和97个残基的C链。4

 

 

特异性和动力学

 来自牛胰腺的α-糜蛋白酶选择性地催化酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和亮氨酸的C-末端的肽键水解。甲硫氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、组氨酸、甘氨酸和丙氨酸的C末端也会发生次级水解。1

\最适pH: 7.88

(pH 6.0时活性最高为35%,pH 9.3活性最高为40%)8

 最适温度:50 °C9

 

 抑制剂

货号 产品名称 加入购物车
A8849 α2-抗纤维蛋白溶酶,来自人血浆,冻干粉,≥5抑制剂单位/ mg蛋白
A1153 抑肽酶,来自牛肺,冻干粉末,3-8 TIU / mg固体
A2504 6-氨基己酸≥99%(滴定法),粉末
A6150 α1-抗胰蛋白酶,来自人血浆,无盐,冻干粉
A8456 4-(2-氨基乙基)苯磺酰氟盐酸盐~97%
A9024 α1-抗胰蛋白酶,来自人血浆,无盐,冻干粉
A9285 α1-抗胰凝乳蛋白酶,来自人血浆,~95%(SDS-PAGE纯化),冻干粉
B1552 溴烯醇内酯≥98%
C7268 糜蛋白酶微生物
D0879 氟磷酸二异丙酯
E7888 N-Acetyl-eglin C重组体,在专有宿主中表达
G2417 甲磺酸加贝酯固体
L2023 亮肽素三氟乙酸盐≥90%(HPLC纯化),微生物
T0256 胰蛋白酶抑制剂I-P型,来自牛胰腺,基本不含盐,冻干粉
T1886 胰蛋白酶抑制剂IV-O型,来自鸡蛋白,纯化的卵抑制剂
T4376 N-对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基酮≥97%(TLC纯化),粉末
T4385 胰蛋白酶抑制剂II-T型,来自土耳其鸡蛋白
T9253 胰蛋白酶抑制剂II-O型,来自鸡蛋白,部分纯化卵类粘蛋白,含有卵抑制剂
T9378 胰蛋白酶抑制剂II-L型,来自菜豆(利马豆),粗制粉末
T9777 胰蛋白酶-糜蛋白酶抑制剂,来自大豆(大豆),冻干粉
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α-糜蛋白酶也能被10mM Cu2 +和Hg2 +完全的抑制

 

 底物

货号 产品名称 加入购物车
S7388 N-琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸对硝基苯胺
S9761 N-琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-7-酰氨基-4-甲基香豆素
01530 N-乙酰-L-酪氨酸乙酯一水合物,BioChemika,≥99.0%(对映异构体总和,HPLC纯化)
A3401 丙氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸-7-酰氨基-4-甲基香豆素
A9273 丙氨酸-丙氨酸-缬氨酸-丙氨酸对硝基苯胺
13110 镁,按照Grignard试剂,≥99.5%,车工制作
B6125 N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯
B6760 N-苯甲酰-L-酪氨酸对硝基苯胺
13135 N-苯甲酰-L-酪氨酸对氨基苯甲酸钠盐,BioChemika,冻干,≥98.0%(对映异构体总和,HPLC纯化)
G3769 戊二酰-丙氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸-4-甲氧基-β萘酰胺
49737 戊二酰-L-苯丙氨酸7-酰氨基-4-甲基香豆素,BioChemika,用于荧光,≥98.0%(HPLC纯化)
49738 N-谷氨酰-L-苯丙氨酸对硝基苯胺,BioChemika,≥98.0%(HPLC纯化)
49742 N-(N-戊二酰-L-苯丙氨酰基)-2-氨基吖啶酮,BioChemika,用于荧光,≥98.0%(HPLC纯化)
M4507 4-甲基伞形基对三甲基铵肉桂酸酯氯化物粉末
85977 N-琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸对硝基苯胺,BioChemika,≥99.0%(HPLC纯化)
S1899 N-琥珀酰甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-对硝基苯胺
S2628 N-琥珀酰-L-苯丙氨酸对硝基苯胺
85992 N-(N-琥珀酰-L-苯丙氨酰基)-2-氨基吖啶酮,BioChemika,用于荧光,≥98.0%(HPCE纯化)

   

 溶解性和溶液稳定性

糜蛋白酶通常可溶于1mM HCl中(2mg / ml),产生澄清的溶液。
在含有2 mM CaCl2的1 mM HCl中复溶,等分之后于-20℃保存。储存在较高的pH下会发生自溶作用。钙可以作为其稳定剂。5冷冻的分装试剂可稳定保存约1周。糜蛋白酶既可被Ca2 +激活,也可被其稳定。在0.1%SDS和2M盐酸胍中,该酶也是有活性的。



 应用

对于肽的消化,糜蛋白酶:肽的比例约为1:60(质量比)。消化条件为30℃,pH 7.8,在含有10mM CaCl2的100mM Tris HCl中进行肽消化。如果温度高于37°C,则可能会发生自行消化。所有实验都应使用已知的肽(例如蜂毒肽)作为对照。在37-40°C孵育24小时。可以通过调整pH值到2.0来终止消化。6,7

 

 

 产品

货号 产品名称 加入购物车
C4129 α-糜蛋白酶II型,来自牛胰腺,基本不含盐,冻干粉,≥40单位/ mg蛋白质
C7762 α-糜蛋白酶I-S型,来自牛胰腺,基本不含盐,冻干粉
C6423 α-糜蛋白酶,来自牛胰腺,适用于蛋白质测序,不含盐,冻干粉
C3142 α-糜蛋白酶Ⅶ型(经TLCK处理),来自牛胰腺,基本不含盐,冻干粉,≥40单位/ mg蛋白质
C9134 α-糜蛋白酶-琼脂糖,来自牛胰腺冻干粉,2,000-3,500单位/ g琼脂糖(1ml凝胶产生65-120单位)
C5088 α-糜蛋白酶-聚乙二醇,~20苯甲酰酪氨酸乙酯单位/ mg蛋白质
C4879 α-糜蛋白酶原A II型,来自牛胰腺,基本不含盐,冻干粉,≥40单位/ mg固体(活化成α-糜蛋白酶后)
C1012 α-糜蛋白酶VI型(用DFP灭活),冻干粉,<0.2单位/ mg蛋白

   

 参考文献

1.      Enzymes of Molecular Biology, vol. 16, Burrell, M. M., ed., Humana Press (Totowa, NJ: 1993), pp. 277-281.

2.      Ui, N., Isoelectric points and conformation of proteins. II. Isoelectric focusing of alpha-chymotrypsin and its inactive derivative. Biochim. Biophys. Acta229(3), 582-589 (1971).

3.      Desnuelle, P.: The Structure of Chymotrypsin,The Enzymes, 3rd Ed. Vol. 3, P. Boyer, H. et al., Ed., Academic Press, NY, 185-191, 1960

4.      Hess, G. P., The Enzymes, 3rd ed., vol. 3, Boyer, P. D., ed., Academic Press (New York, NY: 1971), pp. 213-248.

5.      Burrell, M.M., Enzymes of Molecular Biology, Vol. 16, 278-281 (1993).

6.      Spackman, D.H., et al., J. Biol. Chem.235, 648-659 (1960)

7.      Kamp, R. M. (1986) Advanced Methods in Protein Microsequence Analysis (Wittmann-Liebold, B., Salnikow, J., and Erdmann, V., eds) pp 8-20, Springer Verlag, Berlin

8.       

9.      Asgeirsson, B.; Bjarnason, J.B.; Comp. Biochem. PhysiolB 99B, 327-335 (1991)

10.    Fernandez, M.; Villalonga Mde, L.; Fragoso, A.; Cao, R.; Villalonga, R.; Biotechnol. Appl. Biochem. 36, 235-239 (2002)