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Xa因子

物理性质和体内处理

Xa因子(Factor Xa)是一种丝氨酸胞内蛋白酶,它是S1蛋白酶家族成员之一。Xa因子在凝血级联系统(824 K PDF)中具有重要作用,它可以催化凝血酶原发生蛋白水解,从而转化为活性凝血酶。当Xa因子在体内与V因子、钙离子和磷脂在活性血小板表面形成复合物时,Xa因子的凝血酶原转化活性将大大提高。

酶原形式,即X因子,在体内通过两种不同途径被激活。内源性途径利用由Ixa因子、VIII因子、磷脂和钙离子组成的催化性复合物。外源性途径利用由VII因子和组织因子组成的复合物。X因子酶原是一个分子量为55 KDa的糖蛋白,其轻链和重链由一个二硫键连接。

 

X因子的活化过程包含从酶原重链的氨基酸末端水解下来一个9.5 KDa的肽,所得活化Xaα因子的分子量为45.3 KDa。从重链的羧基末端进一步水解一个小糖肽,得到具有相同凝血活性的Xaβ因子。Xa因子的重链和轻链也是通过一个二硫键相连。2,3

 

特异性、测定和动力学

Xa因子先后催化凝血酶原的Arg-Thr和Arg-Ile键发生水解,得到活性凝血酶。其相当严格的识别序列为:Ile-Glu (or Asp)-Gly-Arg--X。4,5, 6

Xa因子有时会切割其他碱性残基,具体取决于目标蛋白的构造。如果识别序列的精氨酸后面有一个脯氨酸残基,则Xa因子不会对其进行切割。

最适pH:7.6-8.07,8

最佳温度:37 °C6

测定

单位定义:在pH 8.3,温度37 °C的条件下,一单位的活化X因子每分钟可使N-苯甲酰-L-异亮氨酰-L-谷氨酰-L-甘氨酰-L-精氨酰-对硝基苯胺释放出1.0 µmole对硝基苯胺。

反应缓冲液为50 mM Tris,pH 8.3,含5 mM氯化钙和0.2 mM氯化钠。

 

 

抑制剂

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A8849 α2-抗纤维蛋白溶酶,来源于人血浆,冻干粉末,≥5抑制剂U/mg蛋白质
A6397 抗凝血酶III,来源于大鼠血浆,冻干粉末,>200 U/mg蛋白质(E1%/280 = 6.5)
A2221 抗凝血酶III,来源于人血浆,冻干粉末,≥95%(SDS-PAGE)
A9141 抗凝血酶III,来源于牛血浆,冻干粉末,200-400 U/mg蛋白质(E1%/280 = 6.5)
D0879 氟磷酸二异丙酯
D7910 3,4-二氯异香豆素
E1398 重组大肠杆菌素,表达于大肠杆菌中,≥90%(SDS-PAGE),几乎不含盐,冻干粉末,≥2000 U/mg蛋白质

底物

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B7020 N-苯甲酰-异亮氨酰-谷氨酰-甘氨酰-精氨酰对硝基苯胺醋酸盐
B9760 丁氧羰基-异亮氨酰-谷氨酰-甘氨酰-7-氨基-4-甲基香豆素盐酸盐
F3301 Xa因子固体发色底物
51015 4-硝基苯基4-对胍基苯甲酸盐酸盐,BioChemika,≥95.0% (AT)

溶解度和溶液稳定性 Xa因子(货号 F9302)的产品形式为50%甘油水溶液,最多可进一步稀释至100 µg/ml,稀释剂为HEPES、PBS或TBS(pH 7.4),或者40 mM柠檬酸盐缓冲剂(pH 6.8)。稀释至更低浓度可能导致蛋白质因吸附而流失。Sigma活性测定步骤中的酶稀释剂为含0.5%蔗糖的40 mM柠檬酸,pH 6.8。

 

应用和临床意义

  • 遗传性X因子缺陷症是一种极其罕见的疾病。但是,获得性X因子水平降低可能是由多种因素引起,包括淀粉样变性、维生素K缺乏和口服抗凝血剂用药。X因子缺陷症可导致凝血酶原和部分促凝血酶原激酶时间延长。
  •  融合蛋白通常与Xa因子切割的Ile-Glu (or Asp)-Gly-Arg--X序列一起表达。通常,1mg融合蛋白可以与10 µg Xa因子在37 °C下孵育2.5小时。

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产品

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F9302 活化X(Xa)因子,来源于牛血浆

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PRKF Xa因子清除试剂盒
F5132 II因子,来源于人血浆

参考文献

1.   IUBMB Enzyme Nomenclature: http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC3/4/21/6.html

2.   Fujikawa, K. and Davie, E.W., Methods Enzymol.XLV, 89-95 (1976)

3.   Jesty, J and Nemerson, y., Methods Enzymol.XLV, 95-107 (1976)

4.   Walz, D.A., et al., Proc. Natl, Acad. Sci., USA74, 1969-1972 (1977)

5.   Butkowski, R.J., et al., J. Biol. Chem.252, 4942 (1977)

6.   Nagai, K. and Thogerson, H.C., Methods Enzymol.153, 461481 (1987)

7.   Srivastava, A., et al., J. Biol. Chem.277 1855-1863 (2002)

8.    

9.   Sperl, S., et al., Biol. Chem., 381, 312-329 (2000)

10.   Ludeman, J.P., et al., Int. J. Biochem. Cell Biol.35, 221-225 (2003)

11.   Gardella, T.J., et al., J. Biol. Chem.265, 15854-15859 (1990)

12.   La Vallie, E.R., and McCoy, J.M., "Enzymatic Cleavage of Fusion Proteins with Factor Xa" in Current Protocols in Molecular Biology, 2, Supplement 28, Ausubel, F.M., ed., (John Wiley & Sons, New York, 1994) p.16.4.6-16.4.7

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