过氧化物酶

   过氧化物酶 过氧化物酶
来自辣根和大豆
EC 1.11.1.7
同义词:过氧化氢氧化还原酶,HRP

过氧化物酶活性 |  技术信息

我们的圣路易斯生产厂

厂生产过多公斤批量的过氧化物酶。在这段时间里,我们直接与特别挑选和培育辣根的种植者合作,并不断实施长期的工艺改进,以保证质量、一致性和优化产量。虽然世界其他地区的辣根供应一直是个问题,但北美的辣根供应却越来越充足。我们的圣路易斯生产厂俯瞰着密西西比河谷的一个地区,这个地区被称为美国谷底,世界上60%的辣根都产自这里。 该生产厂拥有经验丰富且训练有素的员工队伍,在严格的质量和质量保证体系下遵循严格的加工、设备、清洁、测试和包装操作规程。

我们的过氧化物酶被全世界公认为诊断制造和实验室规模研究应用的行业标准。

我们提供多种基于纯度、异构体含量和共价修饰的产品,以适应既定应用以及基础研究需求。

 

HRP生产的研磨提取和初始过滤步骤

生产的研磨提取和初始过滤步骤

 

 活性

具体活动以焦棓酚单元表示。除非列表中另有说明,一个连苯三酚单元将在20℃,ph6.0条件下,在20秒内从连苯三酚形成1.0mg的红棓酚。这个红棓酚(20秒)单元相当于25°C时每分钟约18个微米单元。

具体活动以焦棓酚单元表示。

ABTS单元是另一个常用的单元定义。一个ABTS单元将在25°C、pH 5.0条件下每分钟氧化1微摩尔ABTS。使用ABTS作为底物在连苯三酚系统上观察到约四倍的活性。

ABTS单元是另一个常用的单元定义

.雷氏曲线是在去离子水中以0.5-1.0毫克/毫升测定的吸光度比值A403/A275。它是测定 血红素含量的一种方法,不一定表示酶的活性。

 

 技术信息及相关产品

天然辣根过氧化物酶的产品特性

消光系数:当在403nm处测量时,微米=100。1

分子量:(约44 kDa)
    包括多肽链(33,890道尔顿),氯化血红素加Ca2+(约700道尔顿)、和  碳水化合物(9400道尔顿)。3

等电点:同工酶的范围为3.0–9.0
    至少有7种HRP同工酶存在。2

辣根过氧化物酶(HRP)分离自辣根(紫穗槐),属于过氧化物酶的铁原卟啉基团。HRP是含有四个二硫键的单链多肽。它是一种含有18%碳水化合物的糖蛋白。碳水化合物由半乳糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、甘露糖、甘露糖胺和半乳糖胺组成,具体取决于特定同工酶。2

 

底物特异性

HRP容易与过氧化氢(H2O2)结合,生成的[HRP-H2O2]配合物可以氧化多种显色氢供体。它还可以利用鲁米诺和异鲁米诺等化学发光底物和酪胺、高香草酸、4-羟基苯乙酸等荧光底物。

Enzyme Explorer的底物指数提供了几个用于测定过氧化物酶活性的显色和化学发光氢供体的链接。

抑制剂

下列化合物为辣根过氧化物酶的抑制剂:叠氮化钠、氰化物、L-胱氨酸、重铬酸盐、乙烯硫脲、羟胺、硫化物、钒酸盐、对氨基苯甲酸、Cd+2、Co+2、Cu+2、Fe+3、Mn+2、Ni+2、Pb+24

pH依赖性

HRP的最适pH值在6.0~6.5范围内;PH7.5的活跃度为最大值的84%。该酶在5.0~9.0的pH范围内最稳定。5

应用

辣根过氧化物酶在包括ELISA、免疫印迹和免疫组织化学等许多不同的免疫化学应用中被广泛用作免疫球蛋白的标记物。HRP可以通过几种不同的方法与抗体结合,包括戊二醛,高碘酸盐氧化,通过二硫键,以及通过氨基和巯基定向交联剂。HRP是抗体最理想的标记,因为它是三种最常见的酶标记(HRP,碱性磷酸酶和B-半乳糖苷酶)中最小和最稳定的,其糖基化可导致更低的非特异性结合。6描述戊二醛和高碘酸盐偶联方法的方案可以在Harlow,E.等中查看。7

我们供应几种显色和化学发光检测试剂,用于印迹组织学ELISA应用。

我们还可供应HRP偶联抗体的完整系列。

制备说明

溶剂的选择将取决于预期应用。粉末状酶为可溶性水或0.1m磷酸盐缓冲液,ph6(10mg/ml)。悬浮液(P6140)可在水中稀释。

储存/稳定性

粉末状过氧化物酶应在2-8℃冷藏。冷冻库也是可以接受的,但不是必需的。混悬液(P6140)应保存在2-8℃。如果储存得当,这些产品的保质期至少为两年。

冻干粉的温度稳定性
溶液的温度稳定性
溶液的稳定性与pH
溶液的稳定性与浓度

雷氏曲线

雷氏曲线:吸光度比值A403/A275。它是过氧化物酶的血红素含量的量度,而不能测定酶活性。即使是RZ值较高的制剂也可能具有较低的酶活性。要将抗体等蛋白质与过氧化物酶结合,请选择RZ值至少为3.0的过氧化物酶。

分光光度法测定过氧化物酶的RZ值

用于标记的过氧化物酶

 

 参考文献

  1. Delincee, H. and Radola, B.J., Eur. J. Biochemistry, 52, 321–330 (1975).
  2. Shannon, L.M., et al., J. Biol. Chem., 241, 2166–2172 (1966).
  3. Welinder, K.G., Eur. J. Biochem., 96, 483–502 (1978).
  4. Zollner, H., Handbook of Enzyme Inhibitors, 2nd Ed., Part A: 367–368 (1993).
  5. Schomberg, D., Salzmann, M., and Stephan, D., Enzyme Handbook 7, EC 1.11.1.7:1–6 (1993).
  6. Deshpande, S.S., Enzyme Immunoassays, From Concept to Product Development, Chapman and Hall, 169–171 (1996).
  7. Harlow, E. and Lane, D., Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 346–348 (1988)
  8. Ugarova, N.N., et al., Biochim. Biophys. Acta, 570, 31–42 (1979).