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XIV型蛋白酶

从灰色链霉菌分离

别名:链酶蛋白酶E,链酶蛋白酶

本页内容:


物理性质

XIV型蛋白酶是具有至少三种酪蛋白水解活性和一种氨基肽酶活性的混合物。酪蛋白水解酶别名为灰色链霉菌蛋白酶A、灰色链霉菌蛋白酶B和灰色链霉菌胰蛋白酶。3 其氨基酸序列和分子量已有报道:蛋白酶A为180934、蛋白酶B为186295,灰色链霉菌胰蛋白酶为22918。6胰蛋白酶的性质也有报道。77两种不同的蛋白质水解活性值分别为16,000和18,0008;分子量通常由凝胶过滤法来确定,范围为16,000至27,001。对于1、2篇关于分离、性质和结构的详细文献进行了注明。1

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特异性、稳定性和动力学

这种蛋白酶混合物非特异性极高,因此可以作为单一氨基酸将酪蛋白消化至70%。1,2在消化酪蛋白方面,它比胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和其他几种蛋白酶更有效。9

XIV蛋白酶型在pH 5.0~9.0范围内高度稳定,但在pH 4以下和pH 10以上则相当不稳定。1 酶中的中性组分在pH 5-9、钙存在的情况下是稳定的;碱性组分在整个pH 3-9是稳定的,在pH 9-10时为活性最佳。氨基肽酶和羧肽酶组分在pH 5-8、存在钙离子的情况下是稳定的。2 在pH 7-8时为活性最佳。

该产品在37°C条件下pH 7.5时溶解于0.01 M醋酸钠与0.005 M醋酸钙;在0.2 mg/ml浓度时,澄清溶液从无色到淡褐色。建议提出钙离子可以保护防止自身溶解。在2~8°C中性pH值条件下,含0.01-0.1 M钙离子的稀释酶溶液的活性在24小时内是稳定的。XIV型蛋白酶在4°C条件下至少稳定6个月。5至20 mg/mL的原液通常储存在20°C条件下。2

该产品在80°C以上受热15-20分钟则可完全失活。1混合物中的某些成分比其他成分更快地失活。添加过量的EDTA会导致不可逆地丧失约70%的原有活性。该混合物在1% SDS (w/v)和1% Triton (w/v)保持活性。

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抑制剂

没有一种物质能同时抑制混合物中所有不同的蛋白酶(请见结构)。DFPPMSFEDTA可抑制其中的部分酶。



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应用

  • DNA分离:2,13  XIV型蛋白酶通常作为原液进行制备;储存在-20°C之前,首先加热溶液至56°C并持续约15分钟,然后在37℃下培养1个小时。这将有助于自消化,以消除DNAse和RNAse污染。将该酶添加到DNA样品中(在0.5-1% SDS存在的条件下以中断DNA蛋白质互作),通常在250-500µg 蛋白/mL,然后在37°C条件下培养1至4个小时。
  • 蛋白质水解:在pH 8(或磷酸盐缓冲液pH 7)的条件下溶解约0.2微摩尔的蛋白质于0.2 mL的50 mM碳酸氢铵缓冲液中。加入XIV型蛋白酶至1%(w/w),在37°C条件下培养24小时。可能需要加入4%(w/w)的氨基肽酶,并在37°C条件下培养18小时。
  • 氨基酸酰胺水解10
  • 肝组织切片进行预处理:以增强免疫染色的效果11
  • 某些类型亲和柱的再生12

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产品
货号 产品名称 加入购物车
P5147 来自灰色链霉菌的蛋白酶,XIV型,GE;3.5 unit/mg 固体,粉末
P8811 来自灰色链霉菌的蛋白酶,~4 unit/mg固体,粉末,经过小鼠胚胎测试
P6911 来自灰色链霉菌的蛋白酶,分子生物学试剂,DNase,RNase和切口酶,未检测到(无RNase)

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参考文献

  1. Supplier information
  2. Enzymes of Molecular Biology (Methods in Molec. Biol., Vol. 16), M.M. Burrell, ed., Chapter 14, pp. 271-276.
  3. Jurasek, L., Johnson, P. et al., Canadian J. Biochem., 49, 1195 (1971).
  4. Johnson, P. and Smillie, L.B., FEBS Letters, 47, 1-6 (1974).
  5. Jurasek, L. and Carpenter, M.R. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 61, 1095-1100 (1974).
  6. Olafson, R.W. and Jurasek, L. et al., Biochemistry, 14, 1168 (1975).
  7. Olafson, R.W. and Smillie, L.B., Biochemistry, 14, 1161-1167 (1975).
  8. Wahlby, S., Biochim. Biophys. Acta, 185, 178-185 (1969).
  9. Nomoto, M. et al., J. Biochemistry, 48, 593-602 (1960).
  10. Yamskov, I.A. et al., Enzyme Microb. Technol., 8, 241 (1986).
  11. Litwin, J.A. et al., Histochemistry, 81, 15-22 (1984).
  12. Holroyde, M.J. et al., Biochem. J., 153, 351-361 (1976).
  13. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Sambrook et al., eds. (Cold Spring Harbor Press, 1989), p. B.16.
  14. Nomoto, M. and Narahashi, Y., J. Biochemistry, Papers I - VII: 14a. 46, 653 (1959); 14b. 46, 839 (1959); 14c. 46, 1481 (1959); 14d. 46, 1645 (1959); 14e. 48, 453 (1960); 14f. 48, 906 (1960).

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