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抑肽酶

物理性质

虽然抑肽酶和牛胰蛋白酶抑制剂(BPTI)的蛋白质序列相同,但抑肽酶一词通常用于描述来自牛肺的蛋白质。

抑肽酶是具有三个二硫键的单肽链。 分子量:约65111

E1%280nm = 8.3(水)
pI = 10.56

 

抑制剂活性

抑肽酶是一种竞争性的丝氨酸蛋白酶抑制剂,与酶的活性位点形成稳定的复合物并阻断其功能。其结合是可逆的,并且大多数抑肽酶-蛋白酶复合物在pH> 10或<3.2情况下解离。

抑制作用

精子酵素

弱抑制作用6

糜蛋白酶

Ki = 9 nM9

糜蛋白酶原(牛),pH 8.0

Ki = 9 nM4

CMP-唾液酸:乳糖苷神经酰胺-(2,3)-唾液酸转移酶

300 nM时74%抑制作用9
弹性蛋白酶(人类白细胞),pH 8.0

Ki = 3.5 µM4

激肽释放酶(胰腺),pH 8.0

Ki = 1.0 nM4

激肽释放酶(血浆)

Ki = 30 nM; 100 nM9

激肽释放酶(组织)

Ki = 1 nM9

激肽释放酶(尿液)

Ki = 1.7 nM9

纤溶酶(猪),pH 7.8

Ki = 4.0 nM4

纤溶酶原激活剂

Ki = 8 µM; 27 µM9

胰蛋白酶(牛),pH 8.0

Ki = 0.06 pM4

胰蛋白酶原(牛),pH 8.0

Ki = 1.8 µM4

类胰蛋白酶TL-2

16% Inhibition at 10 µM9

尿激酶(人),pH 8.8

Ki = 8.0 µM4

单位定义

一单位胰蛋白酶抑制剂(TIU)可使2单位胰蛋白酶活性降低50%,其中1单位定义为在pH 7.8和25 °C条件下每分钟水解1.0 µmole 的N-α--苯甲酰基-DL-精氨酸对硝基苯胺(BAPNA)所需的胰蛋白酶量。

另一个常用的活性单位是KIU(激肽释放酶抑制剂单元)。

从我们的数据来看,抑肽酶的换算系数是:1 TIU等于约1,300 KIU。公布的比例是:1 TIU等于约1,025 KIU. 10

 

溶解性和稳定性

抑肽酶可自由溶解于水中(> 10 mg / mL)和低离子强度的水溶液中。稀溶液通常不如浓溶液稳定。溶液稳定性还取决于pH值;pH 1-12都可以接受。应避免反复冻融。Cys14-Cys38二硫键容易被还原剂裂解(例如2-巯基乙醇)。由于其紧密的三级结构,抑肽酶对于因高温、酸、碱、有机溶剂或蛋白降解导致的变性来说相对稳定(仅发现嗜热菌蛋白酶能够在加热至60-80℃时有效地降解抑肽酶)。抑肽酶的高碱度使其与通常使用的透析管甚至凝胶过滤基质产生粘附,不过使用乙酰化物质和浓盐溶液(例如0.1M NaCl缓冲液)可最大限度避免该问题。可使用0.2µm滤器过滤进行灭菌。

 

溶剂 浓度 储存温度 随时间损失百分比
含0.9%NaCl和0.9%苯甲醇的无菌水,pH 5.7-6.2

10 mg/mL

0-5°C

<4.3%/年5
2.5%三氯乙酸

N/A

80°C

无损失2

pH <12.6

N/A

N/A

24小时未观测到损失。7

pH >12

N/A

N/A

不可逆变性8

pH 7-8

0.065-1.95 µg/mL

4°C

大约1周6

pH 7-8

0.065-1.95 µg/mL

-20°C

大于6个月6

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参考文献

1.      Merck Index, 12th Ed., S. Budavari, Ed., # 796, p. 128 (1996).

2.      J. Gen. Physiol.19, 991 (1936).

3.      Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem.192, 1 (1930).

4.      Drug Res.33(1), No. 4, 479 (1983).

5.      Sigma data.

6.      Biochemica Information, 1st Ed., J. Keesey, Ed., Boehringer Mannheim Biochemicals, p. 111, Indianapolis (1987).

7.      Biochemistry7, 3634 (1968).

8.      Life Sci.28, 1861 (1981).

9.      Handbook of Enzyme Inhibitors, 2nd Ed., Part B, H. Zollner, Ed., p. 572, VCH Verlagesgesellschaft, Weinheim (1993).

10.    Biotechnology, p. 565 (June 1990).