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糖蛋白分析试剂盒和试剂

糖蛋白分析手册

碳水化合物代谢相关酶

肝素酶,肝素和硫酸乙酰肝素
heparinase_heparin

肝素和硫酸乙酰肝素
这些葡糖胺聚糖(GAG)是由糖醛酸(D-葡糖醛酸或L-艾杜糖醛酸)和D-葡糖胺或N-乙酰-D-葡糖胺组成的重复二糖单元的复合非均质混合物。在每个单糖酸酐单元上发生不同程度的硫酸化(在O或N处),范围从零到三硫酸化。一般来说,乙酰肝素比肝素硫酸化程度低。


肝素酶特异性
肝素酶选择性切割肝素聚合物中葡糖胺和糖醛酸残基之间含有α(1-4)糖苷键的硫酸聚糖。切割通过消除反应进行,形成含有不饱和糖醛酸残基的低聚糖(C4和C5之间的双键)。这些裂解产物可以通过紫外光谱(232 nm)检测。

三种不同形式的肝素酶(I,II和III)具有不同的底物特异性,具体如下:

肝素酶 I
(肝素裂解酶I)
EC# 4.2.2.7

肝素酶I在己糖胺和O-硫酸化艾杜糖醛酸之间的连接处切割肝素和硫酸乙酰肝素(相对活性约3:1),主要产生二糖。该酶还可切割肝素分子中抗凝血酶III结合的五糖结构域。

来自肝素黄杆菌
货号 H2519

肝素酶 II
(肝素裂解酶II)

肝素酶II在己糖胺和糖醛酸残基(葡萄糖醛酸和艾杜糖醛酸)之间的1-4连接处裂解硫酸乙酰肝素至一个较小程度的肝素(相对活性约2:1),主要产生二糖。
肝素酶II的裂解酶能力之前曾被Silva, M.E.和Dietrich, C.P.作为“乙酰肝素酶II”进行分析。

来自肝素黄杆菌
货号 H6512

肝素酶 III
肝素酶III在硫酸乙酰肝素中的己糖胺和葡糖醛酸残基之间的1-4键处裂解,主要产生二糖。该酶对肝素或低分子量肝素没有活性
肝素酶III的裂解酶能力之前曾被Silva, M.E.和Dietrich, C.P作为“乙酰肝素酶I”进行分析。

来自肝素黄杆菌
货号 H8891

参考文献
1. Ernst, S., et al., Enzymatic Degradation of Glycosaminoglycans. Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology, 30 (5), 387-444 (1995).
2. Desai, U.R.,Wang, H., and Linhardt, R.J., Substrate Specificity of the Heparin Lyases from Flavobacterium heparinum. Archives of Biochemistry and Biophysics, 306(2), 461-468 (1993).
3. Schultz, J. S., Biotechnol. Prog., 3, 27-30 (1987).
4. Nader, H. B., et al., Purification and Substrate Specificity of Heparitinase I and Heparitinase II from Flavobacterium Heparinum. Analyses of the Heparin and Heparan Sulfate Degradation Products by 13C NMR Spectroscopy. J. Biol. Chem., 265(28), 16807-16813 (1990).
5. Nader, H. B., et al., Heparin Sequences in the Heparan Sulfate Chains of an Endothelial Cell Proteoglycan. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 3565-3569 (1987).
6. Hovingh, P., and Linker, A., The Disaccharide Repeating-units of Heparan Sulfate. Carbohydr. Res., 37, 181-192 (1974).
7. Linker, A., and Hovingh, P., Heparinase and Heparitinase from Flavobacteria. Meth. Enzymol., 28-B, 902-911 (1972).
8. Silverberg, I., et al., Carbohyd. Res., 137, 227 (1985).
9. Ototani, N., et al., Purification of Heparinase and Heparitinase by Affinity Chromatography on Glycosaminoglycan-bound AH-Sepharose 4B. Carbohydr. Res., 88, 291-303 (1981).
10. Lingardt, R.J., et al., Mode of action of heparin lyase on heparin. Biochem. Biophys. Acta., 702(2), 197-203 (1982).
11. Linker, A., et al., Heparinase and Heparitinase from Flavobacteria. Methods of Enzymology, 28, 902-911 (1972).
12. Lingardt, R.J., et al., Examination of the substrate specificity of heparin and heparan sulfate lyases. Biochem., 29(10), 2611-2617 (1990).
13. Proc. 8th Int. Symposium Glycoconjugates, 1, 73 (1985).
14. Silva, M.E., and Dietrich, C.P., Isolation and partial characterization of three induced enzymes from Flavobacterium heparinum involved in the degradation of heparin and heparitin sulfates., Biochem. Biophys. Res. Commun., 56, 965–972 (1974)

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透明质酸酶和透明质酸
hyaluronidase_hyaluronic_ac

由β-D-(1-3)葡萄糖醛酸和β-D-(1-4)-N-乙酰葡糖胺交替残基而组成

特异性
哺乳动物透明质酸酶(EC#3.2.1.35)可水解透明质酸和类似的糖胺聚糖。来自链霉菌(EC#4.2.2.1)的酶是通过消除反应催化裂解产生4-脱氧-4,5-不饱和寡糖的裂解酶。它对软骨素和其他糖胺聚糖的特异性尚不明确。

透明质酸酶测定
在2008年之前,Sigma-Aldrich公司使用USP(美国药典XXIII-国家药典XVIII组合版)中描述的透明质酸酶测定方法。单位活性使用USP标准化透明质酸酶进行定义,具体为:一个单位是基于USP透明质酸酶参考标准品在于该产品每一个批号进行同时测定时在600nm处的吸光度变化(浊度变化)。.

现在USP已不再提供标准化的透明质酸酶。Sigma-Aldrich为了适应这种不可避免的改变,也已经相应修改了测定方法和单位定义。新的单位定义为:一个单位的透明质酸酶可在37 ºC,pH 5.7的条件下每分钟引起A600nm 0.330的吸光值改变(45分钟测定)。.

新单位定义中选择0.330的吸光值变化正是为了与使用USP透明质酸酶标准定义活性的结果实现最接近的匹配。因此,已经不再使用的基于USP单位定义和Sigma-Aldreich定义的新单位具有大约1:1的换算系数(一个旧单元将约等于一个新单位)。 

测定过程

原始USP过程
现行Sigma-Aldrich方法

酶产品

透明质酸酶
EC# 3.2.1.35
别名:透明质酸氨基葡糖苷酶

哺乳动物糖酵解透明质酸酶(EC#3.2.1.35)催化透明质酸中N-乙酰-D-葡糖胺和D-葡糖醛酸之间1-4键的随机水解。它还能水解硫酸软骨素A和C以及皮肤素中的N-乙酰半乳糖胺或N-乙酰半乳糖胺硫酸盐和葡糖醛酸之间的1,4-β-D-糖苷键。

来自牛睾丸 
货号 H3631 (3,000-15,000 un/mg)
货号 H3884 (750-1500 un/mg)
货号 H4272 (750-1500 un/mg, 经胚胎测试)
货号 H3506 (300-750 un/mg)
货号 H3757 (~300 un/mg)

来自羊睾丸 
货号 H6254 (最低 1500 un/mg)
货号 H2251 (最低 500 un/mg)
货号 H2126 (最低 300 un/mg)


透明质酸酶(透明质酸裂解酶)
EC# 4.2.2.1
别名: 透明质酸裂解酶

在β-D-GalNAc-(1-4)-β-D-GlcA键处裂解透明质酸,最终将多糖分解成3-(4-脱氧-β-D-葡糖-4-烯糖醛酸基)-N-乙酰基-D-葡糖胺

来自透明质酸链菌霉
货号 H1136

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菊粉酶和菊粉
inulinase_inulin

菊粉
菊粉是由α-D-吡喃葡萄糖基-[β-(2-1)D-呋喃果糖基-D-呋喃果糖苷组成的果聚糖寡糖。菊粉通常可以含有2至140个果糖单位

菊粉酶
EC# 3.2.1.7
别名: 内-1,4-β-木聚糖酶

菊粉酶催化菊粉中2,1-β-D-果糖苷键的内切水解

来自黑曲霉
货号 I2017 (Novozymes 果糖酶L)

参考文献
1. Enzyme Nomenclature, (www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC3/2/1/8.html)
2. Azhari, R., et al., Biotechnol. Appl. Biochem. 11, 105-117 (1989)

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果胶酶和果胶
Pectinase_Pectinesterase
rhamno_II

果胶
果胶是复杂的支链杂多糖,主要含有α-(1-4)多聚半乳糖醛酸主链并可随机发生乙酰化和甲基化。目前已从植物细胞壁分离出三种不同的果胶。

  • 同型半乳糖醛酸聚糖由简单的α-(1-4)多聚半乳糖醛酸主链组成。
  • 取代的同型半乳糖醛酸聚糖是对主链上的β-D-木糖分支在C3处的分支或在主链中的β-D-鸟嘌呤-(1,3')-β-D-苯丙氨酸分支的氨基呋喃糖进行取代的修饰。
  • 鼠李糖半乳糖醛酸聚糖I包含交替的α-(1-4)半乳糖醛酸基和α-(1-2)鼠李糖基残基,主要具有寡聚α-(1-3)阿拉伯糖和寡聚β-(1-4)半乳糖分支。
  • 鼠李糖半乳糖醛酸聚糖II由简单的α-(1-4)多聚半乳糖醛酸骨架与由多达11种不同单糖类型的复杂分支所组成。

 


果胶酶
EC# 3.2.1.15
别名: 多聚半乳糖

果胶酶催化果胶和其他半乳糖醛酸中的1,4-α-D-半乳糖苷连接的随机水解。

来自棘孢曲霉
货号 P2611 (Novozymes Pectinex Ultra SPL)

来自黑曲霉
货号 P2736 (Novozymes Pectinex 3XL)
货号 P4716 (甘油水溶液,最低 5 un/mg 蛋白)
货号 P0690 (经植物细胞培养测试)

来自根霉属物种
货号 P2401 (粗粉 400-800 un/g)
货号 P4300 (经植物细胞培养测试)

参考文献
1. Enzyme Nomenclature (www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC3/2/1/15)


果胶裂解酶
EC# 3.2.1.15 & 4.2.2.10
据报道含有两种类型的果胶酶,多聚半乳糖醛酸内切酶(EC3.2.1.15)、内切果胶裂解酶(EC4.2.2.10)和浸软刺激因子。

果胶裂解酶催化(1 4)-α-D-半乳糖醛酸聚糖甲酯的消除性切割,得到在其非还原端具有4-脱氧-6-O-甲基-α-D-半乳糖-4-葡糖醛酸基的寡糖。果胶酶催化果胶和其他半乳糖醛酸中的1,4-α-D-半乳糖苷连接的随机水解。

来自日本曲霉
货号 P3026 (冻干粉, 最低 0.3 un/mg)
货号 P5936 (冻干粉, 最低 2 un/mg)
货号 P5431 (经植物细胞培养测试)

参考文献
1. Enzyme Nomenclature (www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC3/2/1/15 & www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC4/2/2/10)


果胶酯酶
EC# 3.1.1.11
别名: 果胶甲基酯酶

果胶酯酶催化果胶甲酯的水解产生果胶酸酯和甲醇。

来自橙皮
货号 P5400 (冻干粉, 350-700 un/mg)
货号 P0764 (冻干粉, 50-350 un/mg)

参考文献
1. http://www.biobase.de/brenda/php/result_flat.php4?ecno=3.1.1.11

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支链淀粉酶


Pullulanase

支链淀粉酶
EC# 3.2.1.41
别名: 支链淀粉6-葡糖酸水解酶,极限糊精酶

支链淀粉酶催化支链淀粉(α-(1-6)-连接的麦芽三糖单元的线性聚合物)中 的(1-6)-α-D-糖苷键的水解,与支链淀粉和糖原中的异淀粉酶以及支链淀粉和糖原的α-和β-极限糊精类似。

来自嗜酸芽孢杆菌
货号 P2986 (溶液,最低 10 Novozymes un/g, Novozymes Promozyme 400L)

from Klebsiella pneumoniae
货号 P1067 (10-30 un/mg 蛋白,冻干粉)
货号 P5420 (≥5 un/mg 蛋白,硫酸铵悬浮)

参考文献
1. Enzyme Nomenclature www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC3/2/1/41.html

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溶菌酶和肽聚糖
lysozyme

β-(1-4)-N-乙酰基-D-葡糖胺单元的聚合物。交替的残基被修饰以形成N-乙酰胞壁酸并加入乳酸以形成与四肽连接的分支。

溶菌酶
EC# 3.2.1.17
别名: 肽聚糖N-乙酰胞壁酰基水解酶

溶菌酶催化肽聚糖中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰-D-葡糖胺残基之间的1,4-β-键的水解和壳聚糖中N-乙酰-D-葡糖胺残基之间的水解

来自鸡蛋白
货号 L6876 (冻干粉,约 50,000 un/mg)
货号 L7651 (分子生物学级,冻干粉,约 50,000 un/mg)
货号 L7001 (冻干粉,约 50,000 un/mg)
货号 L7773 (无菌填充,冻干粉,约 50,000 un/mg)
货号 L2879 (氯化物,冻干粉,约 60,000 un/mg)
货号 L0289 (生物素-己酰,冻干粉, > 20,000 un/mg)

来自人乳
货号 L6394 (冻干粉,最低 100,000 un/mg)
货号 L1667 (重组型,水稻中表达,冻干粉,最低 100,000 un/mg)

来自人中性粒细胞
货号 L8402 (冻干粉,最低 100,000 un/mg)

参考文献
1. Enzyme Nomenclature (www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC3/2/1/17.html)

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