克隆和表达

用于超灵敏检测重组蛋白的3xFLAG®系统表达载体

3xFLAG系统是原始系统的改进版本,融合了总共22个氨基酸的3个串联FLAG®表位(图1)。含有3xFLAG的融合蛋白的检测比任何其他系统提高多达200倍。像原始的FLAG标签一样,3xFLAG是亲水的,含有肠激酶切割位点,并且尺寸相对较小。因此,蛋白质功能改变,阻断其他表位或降低溶解度的风险被最小化。对于表达水平较低的情况,3xFLAG是理想的选择。我们的CMV载体特征为3xFLAG融合蛋白提供了瞬时或稳定表达选择。

  • 超灵敏系统 - 使用ANTI-FLAG®抗体检测<10飞摩尔样本(图2);适用于哺乳动物细胞中低水平表达的案例。
  • 卓越的检测 – 灵敏度比其他任何系统都高20-200倍(图3)。
  • 多功能 - 增强免疫沉淀反应,免疫印迹和免疫细胞化学的检测。
  • 检测和纯化产品的广泛选择 - ANTI-FLAG抗体,树脂和亲和捕获板。

 


图1. 3xFLAG序列。肠激酶可以去除N-末端3xFLAG标签,肠激酶在Asp-Asp-Asp-Asp-Lys氨基酸序列标签的C-末端之后进行切割。


图2.原始FLAG与3xFLAG的免疫印迹检测。纯化的3xFLAG-BAP(细菌碱性磷酸酶)和FLAG-BAP转移到硝酸纤维素膜上的免疫印迹。用抗FLAG M2单克隆抗体(一级),抗小鼠HRP抗体(二级)和ECL™化学底物进行检测。


图3。3xFLAG的相对灵敏度。每种蛋白质融合标签分别克隆在GST的C端。将纯化的蛋白质从1μg稀释至0.01ng并分析。通过免疫印迹分析使用推荐稀释度的各一级抗体和二级抗小鼠IgG-HRP酶标结合物确定每个标签的检测极限。印迹用ECL显色。


 CMV载体特征

我们的哺乳动物表达载体含有用于在哺乳动物细胞中高水平组成型表达的强CMV启动子。强人类巨细胞病毒(CMV)启动子调控区在COS细胞中驱动组成型蛋白质的表达水平高达1mg/L。对于表达水平较弱的细胞系,蛋白质表达水平通常为〜0.1mg/L。SV40复制起点的存在将导致在接纳SV40复制的COS细胞中高水平的DNA复制。含有前胰蛋白酶前导序列(PPT)的载体导致FLAG融合蛋白分泌到培养基中,使用ANTI-FLAG抗体,树脂和亲和捕获板将蛋白进行纯化。

 瞬时表达载体

  • N-端融合
  • 细胞质表达
  • PPT前导序列分泌
  • 双标签配置
  • 肠激酶去除3xFLAG标签
  • pMB1(pBR322的衍生物)是在细菌细胞中复制的启动区域
  • β-内酰胺酶基因用于细菌中氨苄青霉素抗性筛选

 

产品编号 描述 MCS 区域
E4026 p3xFLAG-CMV™-7.1 N-terminal Met-3xFLAG p3xFLAG-CMV-7.1
E4151 p3xFLAG-CMV™-8 N-terminal 3xFLAG (secreted) p3xFLAG-CMV-8
E6026 p3xFLAG-Myc-CMV™-23 N-terminal 3xFLAG, C-terminal c-Myc (Dual tagged, secreted) p3xFLAG-Myc-CMV-23
E6151 p3xFLAG-Myc-CMV™-24 N-terminal Met-3xFLAG, C-terminal c-Myc (Dual tagged) p3xFLAG-Myc-CMV-24

 稳定的表达载体

  • 用新霉素筛选(G 418硫酸盐)稳定表达
  • N-或C-末端融合
  • 双标签配置
  • 细胞质表达或分泌
  • 肠激酶去除N-末端3xFLAG标签
  • pMB1(pBR322的衍生物)用于在细菌细胞中复制的启动区域
  • β-内 酰胺酶基因用于细菌中氨苄青霉素抗性筛选

 

产品编号 描述 MCS 区域
E4276 p3xFLAG-CMV™-9 N-terminal 3xFLAG (secreted) p3xFLAG-CMV-9
E4401 p3xFLAG-CMV™-10 N-terminal Met-3xFLAG p3xFLAG-CMV-10
E4776 p3xFLAG-CMV™-13 C-terminal 3xFLAG (secreted) p3xFLAG-CMV-13
E4901 p3xFLAG-CMV™-14 C-terminal 3xFLAG p3xFLAG-CMV-14
E6276 p3xFLAG-myc-CMV™-25 N-terminal 3xFLAG, C-terminal c-Myc (Dual tagged, secreted) p3xFLAG-myc-CMV-25
E6401 p3xFLAG-myc-CMV™-26 N-terminal Met-3xFLAG, C-terminal c-Myc (Dual tagged) p3xFLAG-myc-CMV-26

 BICEP™稳定表达载体

  • 卓越的稳定表达
  • Neor基因在EMCV IRES的控制下以不基于cap的方式翻译
  • 稳定的细胞系生产,不用担心质粒损失
  • 表达水平胜过竞争产品>30倍
  • 经过多次传代后保持高表达水平/li>

 

产品编号 描述 MCS 区域
E0904 pBICEP-CMV™-2 N-terminal Met-3xFLAG pBICEP-CMV-2