克隆和表达

T7启动子系统

可实现最高细菌表达水平的T7载体

  • FLAG® 载体可采用ANTI-FLAG® 抗体、树脂和平板实现高灵敏度纯化
  • MAT™ 载体可采用HIS-Select™ 树脂和96孔板进行高质量纯化
  • N端或C端融合
  • 双重标记配置
  • 细胞质表达
  • lac 操纵子可减少“漏”表达
  • 肠激酶可去除 N端FLAG标记

Vector Selection Guide

细菌表达载体
T7启动子系统
  标记位置 标记 抗生素耐受性 货号 描述
单标记 N端 FLAG ampr/kanr P9616 pT7 FLAG 3
amp P1118 pT7 FLAG 1
MAT β-lactamase (ampr) E5780 pT7 MAT 1
C端 FLAG ampr/kanr P9743 pT7 FLAG 4
amp P1243 pT7 FLAG 2
MAT β-lactamase (ampr) E5655 pT7 MAT 2
Dual Tag N,C端 FLAG and MAT E5280 pT7 FLAG-MAT 1
E4905 pT7 MAT-FLAG 2
N端 E5155 pT7 MAT-FLAG 1
C端 E5030 pT7 FLAG-MAT 2

 

产品 MCS 区域
P1118, pT7-FLAG™-1
N-terminal Met-FLAG
 

P1243, pT7-FLAG™-2
C-terminal FLAG

E5780, pT7-MAT™-1
N-terminal MAT
E5655, pT7-MAT™-2
C-terminal MAT
 
E5280, pT7-FLAG-MAT™-1
N-terminal Met-FLAG, C-terminal MAT (dual tag)

E4905, pT7-MAT™-FLAG-2
N-terminal MAT,C-terminal FLAG (dual tag)
E5155, pT7-MAT-FLAG™-1
N-terminal MAT-FLAG (dual tag)

E5030, pT7-FLAG-MAT™-2
C-terminal FLAG-MAT (dual tag)

 

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  • 可增强大肠杆菌(E. coli)筛选灵活性的卡那霉素和氨苄青霉素基因
 

 

产品 MCS 区域
P9618, pT7-FLAG™-3
N-terminal Met-FLAG

P9743, pT7-FLAG™-4
C-terminal FLAG

 

T7载体特性

基于细菌T7启动子的载体可在大肠杆菌(E. col)中表达、检测和纯化重组FLAF和MAT(金属亲和标记)。部分含有T7启动子的载体可以针对FLAG和MAT标记融合蛋白提供多重标记选项。这些载体赋予了氨苄青霉素耐受性,可以轻松筛选阳性转化子。此外,这些载体还含有T1T2转录终止子,pMB(pBR322衍生物)复制起点、f1起点和T7启动子表达的lacI基因。

pT7-FLAG™ 和pT7-MAT™载体提供了非常强效的T7/lac 启动子。相对于tac启动子系统,这类表达载体可以实现更高的重组蛋白产率。但T7启动子存在众所周知的背景(“漏”)表达缺陷,在重组蛋白对宿主细胞具有毒性时是一个先天劣势。鉴于此,Sigma的载体在紧邻启动子的下游位点含有lac 操纵子(lacO)序列,可以减少漏表达。

MAT 标记

MAT 标记或金属亲和标记(HNHRHKH)转为采用HIS-Select镍和钴亲和凝胶纯化重组MAT融合蛋白而设计。HIS-Select产品可以高度选择性纯化组氨酸标记的融合蛋白,如MAT融合蛋白。我们许多的最新载体采用MAT标记,通常与业内熟知的FLAG标记联用。含有载体的MAT标记通常采用N端或C端标记的形式提供。

肠激酶去除FLAG标记

肠激酶的识别序列Asp-Asp-Asp-Asp-Lys出现在FLAG附加表位标记的C端。所有含有N端FLAG序列的融合蛋白的FLAG标记均可去除。根据蛋白质序列上的FLAG标记位置,也可采用肠激酶切割双标记融合蛋白,去除一个或多个标记。