克隆和表达

tac 启动子系统

tac 用于高水平细菌表达载体

  • 细胞质表达或分泌产品
  • FLAG® 载体,用于使用ANTI- FLAG®抗体、树脂和反应板的高灵敏检测和纯化
  • MAT™ 载体,用于使用HIS-Select™树脂和96孔板的高品质纯化
  • N端或C端融合
  • SHIFT™ 载体, 用于所有三种阅读框内的表达
  • 使用肠激酶 去除 N端FLAG标签
  • 可用的表达试剂盒

 

 

载体选择指南

细菌表达载体
tac启动子系统
表达 标签位置 标签 货号 名称
分泌 N-端 FLAG E8158 pFLAG ATS
C-端 E8283 pFLAG CTS
细胞质表达 N-端 FLAG E8033 pFLAG MAC
E9533 pFLAG Shift-12c
MAT E5530 pTAC-MAT-1
C-端 FLAG E8408 pFLAG CTC
MAT E5405 pTAC-MAT-2

 

产品 MCS 区域
E8158, pFLAG-ATS™
N端FLAG(分泌型)
E8033, pFLAG-MAC™
N端 Met-FLAG
 
E8283, pFLAG-CTS™
C端FLAG(分泌型)
E8408, pFLAG-CTC™
C端FLAG
E9533, pFLAG-SHIFT12C
3种阅读框内的N端FLAG融合
 
E5530, pTAC-MAT-1
N端 MAT
 
E5405, pTAC-MAT-2
C端 MAT

 

tac载体特点

使用细菌tac启动子载体,可对大肠杆菌中的重组FLAG和MAT(金属亲和性标签,Metal Affinity Tag)融合进行表达、检测和纯化。这些载体可为氨基酸端或羧基端标签融合提供周质(+ompA)或胞质表达。tac表达载体可产生氨苄青霉素抗性,便于筛选阳性转化株。此外,该载体包含T1T2转录终止子,pMB1(pBR322的衍生体)复制起点,f1区域以及抑制tac启动子表达的lacI基因。载体利用强tac启动子( E. coli trplac 启动子的杂合体),可在使用IPTG作为去阻遏物的情况下,为培养物提供超过10 mg/L的蛋白质表达水平。这些载体可用于任何成熟大肠杆菌表达宿主中的蛋白质表达。

 

tacMAT标签

MAT标签或金属亲和性标签(HNHRHKH)专用于使用HIS-Select镍和钴亲和凝胶的重组MAT融合蛋白纯化。HIS-Select产品可高选择性纯化组氨酸标记融合蛋白,如MAT融合。我们有许多最新载体采用了MAT标签,通常与知名的FLAG标签合用。含有载体的MAT标签具有N端和C端标记两种形式。

 

tacSHIFT载体

FLAG-SHIFT载体适用于氨基酸末端尚未精确定义的序列。这些载体包含一个“移位”序列,可实现所有三种阅读框内的一个插入片段的表达,从而无需考虑最初进行克隆的阅读框。

 

tac使用肠激酶去除FLAG标签

肠激酶的识别序列Asp-Asp-Asp-Asp-Lys被发现存在于FLAG表位标签的C末端。在所有含N端FLAG序列的融合蛋白中,去除FLAG是有可能实现的。使用肠激酶也可能切割双标签融合蛋白,从而去除一个或多个标签,具体取决于FLAG在蛋白质序列中的位置。