克隆和表达

瞬时表达

用于高水平哺乳动物表达的CMV载体


  • FLAG®3xFLAG®载体,用于使用ANTI-FLAG®抗体、树脂和板进行的高灵敏度检测和纯化
  • MAT™载体,用于使用HIS-Select™树脂和96孔板进行的高质量纯化
  • N-或C-端融合
  • 双重标记配置
  • 胞质表达或分泌
  • 肠激酶去除 N端FLAG标记
  • 可用的表达试剂盒

 

 

 

 

 载体选择指南

哺乳动物表达载体
瞬时表达
  标记位置 标记 产品编号 说明
分泌
单标记 N-Terminal 3xFLAG E9908 p3xFLAG-CMV 8
双标记 N,C-Terminal FLAG and c-myc E8658 pFLAG-Myc-CMV 19
双标记 N,C-Terminal 3xFLAG and c-myc E9158 pFLAG-Myc-CMV 23
胞质表达
单标记 N-Terminal FLAG E7033 pFLAG-CMV 2
单标记 N-Terminal FLAG E2275 pFLAG-CMV 6a, b, c (set)
单标记 C-Terminal FLAG E6908 pFLAG-CMV 5.1
单标记 C-Terminal FLAG E3762 pFLAG-CMV 5a, b, c (set)
单标记 N-Terminal 3xFLAG E7533 p3xFLAG-CMV 7.1
双标记 N,C-Terminal FLAG and c-myc E8783 pFLAG-CMV 20
双标记 N,C-Terminal 3xFLAG and c-myc E9283 p3xFLAG-Myc-CMV 24
双标记 N,C-Terminal FLAG and MAT C5864 pCMV-FLAG-MAT 1
双标记 C-Terminal FLAG and MAT C6114 pCMV-FLAG-MAT 2
双顺反子
单标记 N-Terminal FLAG E7029 pBICEP-CMV 3
双标记 N-Terminal FLAG and c-myc E9509 pBICEP-CMV 4

我们还提供用于瞬时表达两个靶点的BICEP双顺反子表达载体。稳定的表达载体也可用于瞬时表达。

产品 MCS 区域
E7033, pFLAG-CMV™-2
N-terminal Met-FLAG
E6908,
C-terminal FLAG
E3762, pFLAG-CMV™-5a,b,c

C-端FLAG(所有三个阅读框中的MCS)
E2275, pFLAG-CMV™-6a,b,c

N-端Met-FLAG(所有三个阅读框中的MCS)
E7533, p3xFLAG-CMV™-7.1
N-terminal Met-3xFLAG
E9908, p3xFLAG-CMV™-8
N-terminal 3xFLAG (secreted)
E8658, pFLAG-Myc-CMV™-19

N-端FLAG,C-端c-Myc(双重标记,分泌)
E8783, pFLAG-Myc-CMV™-20


N-端Met-FLAG,C-端c-Myc(双重标记)
E9158, p3xFLAG-Myc-CMV™-23

N-端3xFLAG,C-端c-Myc(双重标记,分泌)

E9283, p3xFLAG-Myc-CMV™-24

N-端Met-3xFLAG,C-端c-Myc(双重标记)

C5864, pCMV-FLAG-MAT™-1

N-端Met-FLAG,C-端MAT(双重标记)
C6114, pCMV-FLAG-MAT™-2

C-端FLAG-MAT(双重标记)

CMV载体特征

来自Sigma-Aldrich的基于CMV启动子的载体以FLAG、3xFLAG、c-myc或MAT的各种组合为瞬时或稳定表达、胞质表达或分泌以及N端或C端标记提供灵活性。这些融合蛋白易于检测、纯化和分析重组蛋白,以用于广泛的应用。双重标记融合提供检测的灵活性以及筛选全长重组蛋白的方法。

人巨细胞病毒 (CMV) 强启动子调控区使COS细胞中的组成蛋白表达水平高达1 mg/L。对于效力较低的细胞系,蛋白水平通常为~0.1 mg/L。SV40复制起点的存在将导致允许SV40复制的COS细胞中的DNA复制水平较高。CMV载体含有用于细菌细胞中复制的pMB1(pBR322的衍生物)起点、用于细菌中氨苄青霉素抗性选择的b-内酰胺酶基因、hGH polyA和f1起点。含有前胰蛋白酶 (PPT) 前导序列的载体用ANTI-FLAG抗体、树脂和板使FLAG融合蛋白分泌到培养基中进行纯化。

3xFLAG

3xFLAG表位标记比最初的FLAG标记灵敏20-200倍。在表达水平较低的情况下,3xFLAG很适合。3xFLAG仅有22个氨基酸,因此不可能改变蛋白质功能或阻断其他结合位点或表位。和最初的FLAG标记一样,3xFLAG非常亲水,可以用肠激酶裂解

MAT标记

MAT标记或金属亲和标记 (HNHRHKH) 用于使用HIS-Select镍和钴亲和凝胶纯化重组MAT融合蛋白。HIS-Select产品允许高度选择性纯化组氨酸标记的融合蛋白,如MAT融合蛋白。许多最新载体都使用MAT标记,通常与众所周知的FLAG标记相结合。含有载体的MAT标记以用于N-端或C-端标记的形式提供。

肠激酶去除FLAG标记

肠激酶的识别序列Asp-Asp-Asp-Asp-Lys位于FLAG表位标记的C-端。在所有含有N-端FLAG序列的融合蛋白中都可能去除FLAG。双重标记融合蛋白也可以用肠激酶裂解以除去一个或多个标记,这取决于蛋白质序列中FLAG的位置。