植物分子生物学

拟南芥对照引物

设计用于在基于PCR的拟南芥基因表达分析中用作内部对照的三个引物组。所有的三组引物均针对拟南芥主要组织的组成型表达和特异性扩增通过RT-PCR分析进行功能性验证及优化(参见图1 & 2)。这些引物作为数据均一化内部对照的验证,通过用于病原体诱导的拟南芥基因的定量RT-PCR反应而进行。

这些对照引物为拟南芥研究者在基因表达分析中选择内部对照提供了一种简单的解决方案

  • 灵敏、有效并具有高性价比的即用型方案
  • 具有不同的表达水平以匹配靶向基因的表达水平
  • 三种看家基因的选择可匹配用户的特定需求
每组引物含有针对看家基因的正向和反向引物:
产品代码 产品名称
C3115 针对拟南芥CBP20基因的对照引物:
基因位点: At5g44200
扩增于大小: 409 bp
C3615 针对拟南芥Actin-2基因的对照引物:
Gene Locus: At3g18780
Amplicon Size: 257 bp
C3240 针对拟南芥UBC基因的对照引物:
Gene Locus: At5g25760
Amplicon Size: 217 bp
每组引物对(正向及反向)可用于100次PCR/RT-PCR反应(50uL反应体系)

数据分析
图1. 在五个拟南芥组织中针对三个看家基因的终点法Q-RT-PCR扩增结果的凝胶图像
泳道 1: 叶片
泳道 2: 根
泳道 3: 茎
泳道 4: 花
泳道 5: 长角果
  从5个测试组织中分离总RNA并用DNA酶I处理以减少基因组DNA背景。每个反应中使用160ng RNA并采用对照引物进行RT-PCR。来自每个RT-PCR反应的扩增子通过2%琼脂糖凝胶进行分析。

图2. 拟南芥不同组织中看家基因表达的定量比较

 

图 A. 验设置及CT值
图 B. 采用对照引物的实时Q-RT-PCR
孔号 染料 组织类型 标记 CT
A1 SBG1 叶片 CBP20 28.015
A2 SBG1 CBP20 29.078
A3 SBG1 CBP20 28.199
A4 SBG1 CBP20 26.846
A5 SBG1 长角果 CBP20 30.692
孔号 染料 组织类型 标记 CT
B1 SBG1 叶片 Actin-2 24.921
B2 SBG1 Actin-2 23.184
B3 SBG1 Actin-2 24.811
B4 SBG1 Actin-2 24.533
B5 SBG1 长角果 Actin-2 26.753
孔号 染料 组织类型 标记 CT
C1 SBG1 叶片 泛素 29.631
C2 SBG1 泛素 29.866
C3 SBG1 泛素 30.801
C4 SBG1 泛素 28.283
C5 SBG1 长角果 泛素 29.276

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产品代码 产品描述
数量
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