植物蛋白质组学

植物蛋白提取试剂盒


植物总蛋白提取试剂盒,小量,20次反应,10-250 mg( PE0230

   最适于快速、简单的总蛋白提取,无需使用任何超速离心步骤
 
植物亲水蛋白提取试剂盒,小量,20次反应,10-250 mg(PE0210
   专用于从植物组织中提取亲水性可溶性蛋白。该试剂盒还能去除可能干扰下游蛋白质分析和鉴定应用的多种可溶性物质。
 
植物疏水蛋白提取试剂盒,小量,20次反应,10-250 mg(PE0220
   专用于获取具有高特异性的疏水性蛋白质。该方案无需超速离心步骤或含水多聚物的两相分离步骤(APTP)。高度改良的溶解试剂改善了对高度疏水性脂肽的提取性能。
 
植物组分分离蛋白提取试剂盒,小量,20次反应,10-250 mg(PE0240
   该试剂盒包含蛋白质组分的还原剂和烷化试剂,可增强2D凝胶电泳的分离效果。该试剂盒利用离液剂、变性剂和全新的创新型清洁剂进行连续的严格溶解,对提取蛋白质进行组分分离。

特色和优势
  • 经过大部分广泛研究的植物种类测试和验证 — 拟南芥,玉米、大豆、棉花、烟草、松针等
  • 经过组织样品测试和验证 — 叶、花、根和幼苗
  • 可高度特异性提取蛋白质组分
  • 为数据对比提供具有高度重现性结果
  • 可兼容二维电泳
  • 适用于广泛的样品制备动态范围

数据点

经过多个物种和组织测试

图1使用植物总蛋白提取试剂盒从多种植物和组织中提取总蛋白,然后在10-20% Tris甘氨酸SDS-PAGE凝胶上分离。利用ProteoPrep银染试剂盒进行凝胶染色,以检测蛋白质。条带1-7为叶组织,条带8和9为花组织,条带10为幼苗组织,条带11为茎组织,条带12-14为根组织。条带及对应物种如下所示:
1) 拟南芥
2) 番茄
3) 烟草
4) 大豆
5) 玉米
6) 棉花
7) 松针
8) 拟南芥
9) 番茄
10) 拟南芥 幼苗
11) 大豆
12) 玉米
13) 大豆
14) 番茄
15) 标记物

植物亲水蛋白提取试剂盒和植物疏水蛋白提取试剂盒提供特异性蛋白组分分离

图2 为证明蛋白组分分离的特异性,使用Western blot SDS-PAGE免疫印迹分析对拟南芥莲座叶组织提取物进行分离分析。 在4–12% Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝胶上分离利用植物亲水蛋白提取试剂盒和植物疏水蛋白提取试剂盒提取莲座叶获得的连续蛋白质提取物。将蛋白质转印到Immobilon-P膜上。使用3%牛血清白蛋白(溶剂为含0.05%吐温-20的Tris缓冲生理盐水,pH 8.0)封闭转印膜。使用拟南芥特异性一抗标记物和辣根过氧化物酶标记二抗孵育转印蛋白。使用辣根过氧化物酶比色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺二盐酸(TMB)检测二抗结合物。凝胶A. 使用植物亲水蛋白提取试剂盒组分(1:5000鸡抗Rubisco抗体,1:16,000兔抗鸡IgY HRP)检测亲水性可溶性二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶大亚基(RbcL)。凝胶B. 使用植物疏水蛋白提取试剂盒组分(1:1000兔抗CAB 叶绿素a/b结合蛋白抗体,1:16,000抗兔(wm) HRP)检测疏水性叶绿体类囊体膜蛋白和叶绿素a/b结合蛋白(CAB)。

可重现的结果实现数据对比

图3 按照组分分离步骤制备小番茄叶的蛋白质提取物。 对提取物进行Bradford蛋白定量测定,并使用含25 mM DTT的LDS样品缓冲液将样品稀释至0.03 mg/ml。取15 µl (0.45 µg)提取物样品上样至NuPAGE 4–12% BisTris 1.0 mm凝胶上进行电泳分离。使用ProteoSilver Plus银染试剂盒检测蛋白质条带。凝胶A. 来自植物1的相同组织样品的三份提取物。凝胶B. 来自植物1的两份独立组织样品的提取物。凝胶C. 来自植物2和3的两份独立组织样品的提取物。图片展示了每次提取的主要条带。

植物蛋白质提取物的二维电泳

图4 首先在液氮中研磨使幼年拟南芥莲座叶的组织破碎,然后使用植物亲水蛋白提取试剂盒获得亲水性蛋白提取物。 使用三丁基膦使蛋白质样品还原并使用碘乙酰胺使其烷基化。将样品(25 µg)上样至7 cm IPG胶条(pH 4–7)上,使其再水化过夜。在第一维度上分离蛋白质,使用总计2300 V-h的连续梯度电压,使每个胶条维持在低于50 µA,0.1W。使用4–20% Tris甘氨酸在Zoom SDS-PAGE凝胶上,以40 mA、15 W、190 V完成第二维度的分离。使用SYPRO Ruby蛋白质凝胶染色剂染色并使用BioRad Fluoro-S MultiImager进行凝胶成像,以检测蛋白质条带。

在广泛的上样量范围内具有出色的性能

图5 从小番茄叶组织中提取总蛋白。 从270、140和10 mg组织样品中提取总蛋白并在4–20% Tris甘氨酸SDS-PAGE凝胶上分离。使用ProteoPrep银染试剂盒将凝胶染色,以检测蛋白质。使用BioRad Fluro-S MultiImager进行凝胶成像。通过密度测定,对比不同组织量的提取效率。泳道容量分析图表明,在样品制备动态范围内,提取效率相等。

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