磷酸化

翻译后修饰

 
许多蛋白质会在翻译后发生某种形式的修饰。这些修饰导致在分析过程中检测到的质量发生变化(参见“蛋白质和多肽的典型翻译后修饰造成的质量表化表”)。举例来说,糖基化、磷酸化和硫酸化等翻译后修饰具有许多功能。因此,蛋白质及其翻译后修饰的分析对于研究已知涉及多种基因的疾病(如心脏病、癌症和糖尿病)非常重要。
 

 
 
磷酸化
可逆性磷酸化是最重要的和得到充分研究的翻译后修饰之一。磷酸化最常发生于苏氨酸、丝氨酸和酪氨酸残基,对细胞周期、生长、凋亡和分化等多种细胞进程的调节具有重要作用。因此,磷酸化位点的鉴定和表征对于了解各种信号传导事件至关重要。对经过胰蛋白酶消化而获得的磷酸化多肽进行质谱(MS)分析,是一种强大的表征方法(Stensballe, A., et al., 2000)。但是,为了抵消低丰度、弱离子化和抑制效应,通常需要大量富集样品中的磷酸化多肽成分(Zhou, W., et al., 2000)。(/td)

固定化金属离子亲和色谱(IMAC)已成为常用的磷酸化化合物纯化方法。Sigma的PHOS-Select™铁亲和凝胶基于我们的专利(正在申请专利)NTA类似物螯合配体,采用新型铁[Fe(III)]螯合基质制备。这种基质对含磷酸基团的分子具有高容量亲和结合能力,使这些产品成为从蛋白质胰酶消化物中富集磷酸化多肽或富集较小的有机磷酸化合物(如腺苷酸5’-单磷酸盐)的理想选择。这些产品也可用于将磷酸化合物直接转移至HPLC或质谱分析。

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糖基化
最常见的蛋白质翻译后修饰之一是糖基化,即寡糖的共价结合。天冬酰胺连接(N连接)或丝氨酸/苏氨酸连接(O连接)形式的糖是许多细胞表面和分泌蛋白的主要结构成分。糖蛋白在蛋白质分选、免疫识别、受体结合、炎症和致病性等细胞进程中都具有重要作用。

寡糖结构的多样性常导致糖蛋白的质量和电荷不均匀。糖基化的这种复杂性质给蛋白质组学分析带来了困难。Sigma通过提供去糖基化试剂盒、大量独立的糖苷酶和多种糖基化抑制剂,简化了糖蛋白的分析。还可提供用于检测或纯化糖蛋白的糖蛋白染色剂、标记凝集素和凝集素树脂。

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蛋白质组学应用(如ICAT)中的生物素化多肽富集
Sigma链霉亲和素HC(高容量)多孔板采用高度多孔的高密度链霉亲和素包被。链霉亲和素与亲和素具有相似的生物素结合特性。链霉亲和素可使1摩尔蛋白质结合4摩尔生物素,具有高选择性和亲和性(Kd~10-15)。与亲和素不同,链霉亲合素具有近中性等电点(pl),可减少常发生于碱性亲和素蛋白质的非特异性结合。
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