蛋白色谱

用于凝胶过滤色谱的分子量标准品

凝胶过滤色谱法是确定蛋白大小和分子量的公认方法。给定蛋白的分子量可以通过其洗脱体积与已知蛋白标准品的洗脱体积进行比较来确定。将蛋白标准品的分子量的对数值相对于它们各自的洗脱体积与柱空隙体积的比率进行作图,则可获得基本线性关系。其中柱空隙体积为通过诸如蓝色葡聚糖之类非常大的分子的洗脱体积。

 

用于测定大小的典型蛋白质的例子包括:

蛋白 近似分子量
生长抑素 1640
抑肽酶,牛肺 6,500
细胞色素C,马心脏 12,400
碳酸酐酶,牛红细胞 29,000
白蛋白,牛血清 66,000
酒精脱氢酶,酵母 150,000
β-淀粉酶,甘薯 200,000
去铁铁蛋白,马脾 443,000
甲状腺球蛋白,牛 669,000
蓝色葡聚糖 2,000,000

 

Sigma® 提供这些蛋白质的单个蛋白形式,同时也提供相应分子量范围试剂盒。许多蛋白质标准品也适用于其他色谱系统,包括HPLC。一些缓冲体系可能会改变白蛋白和碳酸酐酶的洗脱体积。

 

校准曲线举例:

Calibration Curve Sephadex G-75-50 Graph 使用特定蛋白质在Sephadex G-75-50上运行获得的典型校准曲线。该图所示的校准曲线不能用于具体实验结果的推导。每个实验室必须针对自己的系统绘制相应的校准曲线。

 

 

 

Calibration Curve Sepharose 6B Graph 使用特定蛋白质在Sepharose 6B上运行获得的典型校准曲线。该图所示的校准曲线不能用于具体实验结果的推导。每个实验室必须针对自己的系统绘制相应的校准曲线。

 

参考文献

  • Whitaker, J.R. Anal.Chem., 35, 1950 (1963).
  • Andrews, P. Biochem. J., 91, 222 (1964).
  • Marshall, J.J. Chromatog., 53, 379 (1970).

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