重组蛋白纯化和检测

FLAG®系统:重组蛋白纯化,检测和表达

坚持原创且久经考验的执行者

FLAG系统是表达、纯化和检测重组融合蛋白的成熟方法。FLAG和3xF可用于免疫印迹、免疫细胞化学、免疫沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白质-蛋白质互作、细胞超微结构和蛋白定位研究。与我们的高特异性、高灵敏度ANTI-FLAG® 抗体联用时,这些小亲水标签显著改善了重组融合蛋白的检测和纯化。

  • 序列高度带电,可用于灵敏检测
  • 可使用3x FLAG抗原决定簇提高灵敏度
  • 促进低丰度蛋白质的研究和复杂蛋白表达项目的优化

FLAG蛋白表达系统概述
促进低丰度蛋白质的研究和复杂蛋白表达项目的优化

3xFLAG的灵敏度比较
用FlAG进行细胞化学染色

FLAG 和3xFLAG 产品

 

 FLAG蛋白表达系统概述

FLAG系统利用一个短亲水8-氨基酸肽(天冬氨酸-酪氨酸-赖氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸),在pFLAG载体表达时以与目标重组蛋白融合。FLAG肽包括几种高度特异性的抗FLAG单克隆抗体(M1,M2,M5)和多克隆抗体以及复合物的结合位点,且每个抗体和复合物具有不同的识别和结合特性。由于其亲水性,FLAG肽可能定位于融合蛋白表面。因此,FLAG肽易于抗体检测,也便于被肠激酶(Ek)切割。除此之外,FLAG肽标记很小,因而不大可能遮蔽其它的抗原决定簇或结构域,也不会改变融合蛋白的功能、分泌以及运输。

3xFLAG系统在最初的系统基础上做了改进,是融合了3个串联的FLAG抗原决定簇的重组蛋白(图1)。使用3X FLAG融合系统显示了10-20倍的增强(图2,3)。与最初的FLAG标签一样,3xFLAG也是亲水的,含有Ek切割位点,并且相对较小(22个氨基酸)。因此,蛋白质功能改变、遮蔽其它抗原决定簇或是溶解度减小的风险被降到最低。

查看FLAG蛋白表达系统概述

FLAG and 3XFLAG Amino Acid Sequence

 

 细菌和哺乳动物系统的载体

  • 细胞质表达或分泌
  • 带T7或tac启动子的细菌载体
  • 为哺乳动物系统提供的3XFLAG和FLAG
  • 双标记融合蛋白选项
  • N末端FLAG和3×FLAG载体提供Ek切割位点,以去除融合标签
  • 新的BICEP™载体系列,用于在哺乳动物细胞中进行双顺反子表达; 可实现FLAG融合高性能稳定表达,或实现多基因表达

Purification FLAG Vector

 

 3X FLAG的灵敏度比较

  • 超灵敏; 比任何其他系统灵敏度高20-200倍
  • 可检测<10 fmol
  • 哺乳动物细胞中低水平表达理想产品
  • 3个串联重复的FLAG序列
  • 增强检测免疫沉淀、免疫印迹和免疫细胞化学

Comparative Sensitivity of 3X FLAG®. Each protein fusion tag was cloned separately on the C-terminal of GST.

每个蛋白质融合标签分别克隆在GST的C末端。