假单胞菌培养基和测试

作者:Jvo Siegrist, Product Manager Microbiology, ivo.siegrist@sial.com, Analytix Volume 2007 Article 5


 假单胞菌属的检测、鉴定、分化和培养

紫外光下的HiFluoro假单胞菌琼脂

图1:紫外光下的HiFluoro假单胞菌琼脂

 

假单胞菌是以一种或多种极生鞭毛运动的、杆状、需氧革兰氏阴性细菌。它们几乎无处不在,遍布于土壤、水、植物和动物中。在大多数情况下,它们并不具致病性,事实上是很有益处的。例如,恶臭假单胞菌被用作生物洗涤器,有助于生物降解污染空气和废水中的各种有机化合物。然而,铜绿假单胞菌则是臭名昭著的人类病原体,适应力强,最常影响有免疫问题的患者。它和嗜麦芽假单胞菌都是引起人类感染的主要病菌。致病性假单胞菌分布于全身,最常见于尿道、呼吸道、血液和伤口1

假单胞菌生命力和适应力强,适应广泛的营养源,营养要求简单,在没有任何有机化合物的环境中仍能良好生长。它们可以在多种不同的栖息地和极为不利的条件下长时间存活。它们分布广泛,水、盐溶液、餐具甚至化妆品、药品和和消毒剂以及许多天然和加工食品中均有存在。嗜冷(耐寒)假单胞菌属是引起冷藏肉类、鱼类、贝类和奶制品腐败变质的重要原因。由于假单胞菌在水系中增殖迅速,因此它们可以成为食品和饮料行业的污染源2

假单胞菌通常不属于难养菌。它们可以在非常简单的培养基上生长,例如含有水解蛋白、氯化镁、硫酸钾和琼脂的Kind琼脂。分析微生物学利用微生物的独特生物化学来帮助鉴定。例如,选择性假单胞菌培养基使用溴棕三甲铵、萘啶酮酸、头孢利素、青霉素G、匹马菌素、碱性孔雀绿和其他抑制剂。在培养基中利用蛋白水解活性、脂解活性、荧光素形成、硝酸盐、谷氨酸、溶血反应和其他生化反应来鉴定和分化假单胞菌属。

假单胞菌在伏普试验(Voges Proskauer)、吲哚试验和甲基红试验中呈阴性,但在过氧化氢酶试验中呈阳性。虽然某些菌种在氧化酶试验中呈阴性,但大多数菌种(包括荧光假单胞菌)都给出阳性结果(见图2)。与假单胞菌相关的另一个特征是在铁限制条件下分泌青脓素(荧光素,一种铁载体),这是一种黄绿色荧光色素3。某些假单胞菌属亦可产生其他色素,例如铜绿假单胞菌会产生绿脓素(蓝色色素,一种铁载体)4,荧光假单胞菌会产生喹诺菌素(黄色,有铁存在时变成深绿色,是一种铁载体)5,后者是一种称为红脓素和褪黑素的微红色素(褐色素)。在血液琼脂上可以观察到溶血反应。

 

氧化酶试验

图2:氧化酶试验


假单胞菌的科学分类:
 

    界:细菌界               目 :假单胞菌目  
    门:变形菌门         科:假单胞菌科    
    纲:变形菌纲         属:假单胞菌属    

 

假单胞菌通过恩-杜氏糖解途径(Entner-Doudoroff)利用糖作为能量来源,生成最终产物丙酮酸盐(异化)。该反应使用一组与糖酵解和磷酸戊糖途径中所使用的不同的酶。在假单胞菌属中未观察到发酵分解代谢,但某些菌种,例如铜绿假单胞菌、施氏假单胞菌和脱氮假单胞菌,能够使用硝酸盐作为电子受体而不是氧。当使用脱氮途径时,在厌氧条件下也可以生长。Sigma-Aldrich利用假单胞菌属的生化特性,提供各类用于检测、鉴定、分化、计数和培养假单胞菌的产品,包括革兰氏染色试剂盒以及多种选择性生长培养基(表1)和诊断测试产品(表2)有关假单胞菌和各种其他微生物的培养基和测试的更多信息,请访问我们的网站:www.sigmaaldrich.com/microbiology

表1:假单胞菌培养基

 

货号 品牌 非选择性培养基
A0465 Sigma 替代品巯基醋酸盐培养基
53286 Sigma-Aldrich  脑心浸液肉汤
D3435 Sigma-Aldrich Dey-Engley中和肉汤 
63649 Sigma-Aldrich 滤膜冲洗液(USP)
70149 Sigma-Aldrich  3号营养肉汤
03856 Sigma-Aldrich  4号营养肉汤
70179 Sigma-Aldrich 蛋白胨水 
77187 Sigma-Aldrich 磷酸盐缓冲蛋白胨水
40893 Sigma-Aldrich Vegitone磷酸盐缓冲蛋白胨水
70157 Sigma-Aldrich  巯基乙酸盐肉汤(USP替代品)
41960 Sigma-Aldrich Vegitone浸液肉汤 

 

货号 品牌 选择性富集肉汤及生化鉴定肉汤
00185 Sigma-Aldrich 乙酰胺营养肉汤
17129 Sigma-Aldrich  天冬酰胺脯氨酸肉汤
78886 Sigma-Aldrich 溴棕三甲铵肉汤 
63163 Sigma-Aldrich 孔雀绿肉汤
39484 Sigma-Aldrich 甲基红-伏-普二氏肉汤
14305 Sigma-Aldrich  运动性硝酸盐培养基
72548 Sigma-Aldrich 硝酸盐肉汤 

 

货号 品牌 用于培养、计数和分离的非选择性琼脂
70147 Sigma-Aldrich 乳汁琼脂
70148 Sigma-Aldrich  营养琼脂
44776 Sigma-Aldrich 营养琼脂培养皿(直径55mm) 
80957 Sigma-Aldrich 培养皿计数脱脂乳琼脂
17209 Sigma-Aldrich R-2A琼脂
17175 Sigma-Aldrich  经改良的脱脂乳琼脂
51414 Sigma-Aldrich 经改良的脱脂乳琼脂 
70159 Sigma-Aldrich 胰蛋白胨葡萄糖提取物琼脂
T2188 Sigma-Aldrich 胰蛋白胨葡萄糖酵母提取物琼脂
01497 Sigma-Aldrich  酵母提取物琼脂

 

货号 品牌 分化用非选择性琼脂
7013370133 Sigma-Aldrich 血液琼脂(基础)
21065 Sigma-Aldrich  酪蛋白钙琼脂
55420 Sigma-Aldrich CLED琼脂 
16636 Sigma-Aldrich 经改良的HiCrome(™) UTI 琼脂
60788 Sigma-Aldrich King琼脂A
60786 Sigma-Aldrich  King琼脂B
75315 Sigma-Aldrich OF试验营养琼脂 
P1852 Sigma-Aldrich 假单胞菌琼脂(用于荧光素)
91015 Sigma-Aldrich 三丁酸甘油酯琼脂



货号 品牌 检测和分离用选择性琼脂
11012 Sigma-Aldrich 溴棕三甲铵萘啶酸琼脂
22470 Sigma-Aldrich  溴棕三甲铵琼脂
70887 Sigma-Aldrich 溴棕三甲铵琼脂 
P2102 Sigma-Aldrich 假单胞菌琼脂基础
14521 Sigma-Aldrich 溴棕三甲铵琼脂培养皿(直径55mm)
17168 Sigma-Aldrich  按照Brown &Scott方法改良的乳汁琼脂
17208 Sigma-Aldrich 假单胞菌分离琼脂 



货号 品牌 分化、检测和分离用的带分化系统的选择性琼脂 
50875 Sigma-Aldrich GSP琼脂
78996 Sigma-Aldrich HiFluoro (™) 假单胞菌琼脂基础



表2 假单胞菌的鉴定和分化试验

 

货号 品牌 假单胞菌的诊断试验
88597 Sigma-Aldrich 过氧化氢酶试验
05686 Sigma-Aldrich  DMACA吲哚片
49825 Sigma-Aldrich DMACA试剂 
78719 Sigma-Aldrich 柯凡克试纸
60983 Sigma-Aldrich 吲哚柯凡克试剂
67309 Sigma-Aldrich  吲哚柯凡克试剂
08714 Sigma-Aldrich 甲基红溶液 
70439 Sigma-Aldrich 氧化酶试验
40560 Sigma-Aldrich 氧化酶试纸
07345 Sigma-Aldrich  Gaby-Hadley氧化酶试剂A
07817 Sigma-Aldrich Gaby-Hadley氧化酶试剂B 
18502 Sigma-Aldrich Gordon-McLeod氧化酶试剂


 材料

     


 参考文献

1. Collins, F.M. Pasteurella, Yersinia, and Francisella. In Barron‘s Medical Microbiology, 4th ed., S. Barron, et al., eds., University of Texas Medical Branch at Galveston: Galveston, TX, 1996; Chapter 27.
G C Mead, B W Adams
British Poultry Science 1977-11-01
1. A new selective medium (CFC) has been developed for the rapid isolation of pigmented and non-pigmented pseudomonads associated with the spoilage of poultry meat held under chill conditions. It comprises Difco Heart Infusion Agar supplemented with 50 microgram cephaloridine, 10 microgram fucidin and 10 microgram cetrimide/ml. ...阅读更多
Jean-Marie Meyer, Valérie A Geoffroy, Nader Baida, Louis Gardan, Daniel Izard, Philippe Lemanceau, Wafa Achouak, Norberto J Palleroni
Applied and Environmental Microbiology 2002-06-01
A total of 301 strains of fluorescent pseudomonads previously characterized by conventional phenotypic and/or genomic taxonomic methods were analyzed through siderotyping, i.e., by the isoelectrophoretic characterization of their main siderophores and pyoverdines and determination of the pyoverdine-mediated iron uptake specifici...阅读更多
Gee W Lau, Daniel J Hassett, Huimin Ran, Fansheng Kong
Trends in Molecular Medicine 2004-12-01
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Sandra Matthijs, Kourosch Abbaspour Tehrani, George Laus, Robert W Jackson, Richard M Cooper, Pierre Cornelis
Environmental Microbiology 2007-02-01
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