胶原蛋白附着实验方案、溶解度及稳定性

作者: George SitterleyBioFiles 2008, 3.8, 5.


 I型胶原蛋白实验方案

I型胶原蛋白(货号:C1809C7661C9791C8919*)

必须依据各个细胞系和应用确定最佳附着条件。

  1. 将胶原蛋白加入0.1M乙酸中,制成0.1%(w/v)胶原蛋白溶液。在室温下搅拌1-3小时直至溶解。将胶原蛋白溶液(货号:C8919)稀释10倍,以获得0.01%的工作浓度。
  2. 我们建议将胶原蛋白溶液转移到带有螺纹盖的玻璃瓶中,并在底部铺一层氯仿。使用的氯仿量约为胶原蛋白溶液体积的10%。不得摇晃或搅拌。在低温中静置一夜。在无菌条件下取出含有胶原蛋白的上层溶液。我们不建议采用膜过滤对胶原蛋白溶液除菌。我们发现这种方法会损失大量的蛋白质。
  3. 按6-10 ug/cm2的量包被培养皿。让蛋白质在室温37℃结合数小时,或在2-8℃结合一夜。
  4. 去除包被表面多余的液体,晾干一夜。如果胶原蛋白溶液并非是无菌的,则可将已经干燥的包被表面在无菌组织培养罩中暴露于紫外线一夜以灭菌。
  5. 在引入细胞和培养基之前,用无菌组织培养级水或平衡盐溶液冲洗。

*说明:胶原蛋白溶液(货号:C8919)不需要进行步骤1和步骤2。


 II型和IV型胶原蛋白实验方案

II型和IV型胶原蛋白(货号:C9301C0543C5533

必须依据各个细胞系和应用确定最佳附着条件。

  1. 用0.25%乙酸将II型和IV型胶原蛋白溶解成0.5-2.0 mg/mL的浓度。在2-8°C溶解数小时,偶尔轻摇。
  2. 风干上述蛋白质溶液,如不采用风干方法,则在2-8℃下预培养上述溶液一夜,或在37℃下预培养数小时,以包被组织培养塑料培养皿。
  3. 将已经干燥的包被培养皿置入无菌组织培养罩中暴露于紫外线以灭菌,或者用70%乙醇冲洗除菌。或者,可在0.25%乙酸和0.5%氯仿溶液中透析,从而对胶原蛋白溶液除菌。


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货号:C7661(大鼠尾胶原蛋白)

问题1):我该如何对胶原蛋白溶液除菌?

回答1):我们建议将胶原蛋白溶液转移到带有螺纹盖的玻璃瓶中,并在底部铺一层氯仿。使用的氯仿量应为胶原蛋白溶液体积的~10%。不得摇晃或搅拌。在2-8°C中静置一夜。氯气将向上移动通过胶原蛋白溶液从而达到灭菌目的。在无菌条件下将含有胶原蛋白的上层溶液移至新瓶。我们不建议采用膜过滤对胶原蛋白溶液除菌。我们发现这种方法会损失大量的蛋白质。

问题2):为什么我在胶原蛋白溶液中看到一些不溶物?

回答2)该产品的溶解度规格是清澈至浑浊的无色溶液,在2 μL乙酸水溶液(或0.1N乙酸)中含有1 mg/mL的少量不溶物。可通过沉淀或离心去除不溶物。

货号:C8919(牛皮胶原蛋白溶液)

问题1)为什么胶原蛋白溶液瓶看起来呈乳状或含有微粒?

回答1)货号:C8919牛皮胶原蛋白溶液,通过将经照射的无菌胶原蛋白链与无菌过滤的0.1N乙酸混合数小时来制备。
 胶原蛋白溶解于在无菌条件下分装的乳白色溶液中,期间搅拌。无需进一步过滤。
 由于交联和序列差异性以及在分离和纯化过程中可能发生的结构变化,I型胶原蛋白(Bornstein和Traub)是一种不匀相混合物而非纯化合物。这种差异性以及原材料的微小差异造成溶液每个批次的浊度不同。在将本产品销售给客户之前,我们已对该产品进行了无菌性测试。乳状或颗粒状外观并非是微生物污染,不影响产品的使用。

问题2)产品在冷藏时胶凝。还能用吗?

回答2)这种情况可能会发生,但它不影响产品的使用。产品置于室温升温后,产品会液化。在稀释用于包被培养皿之前,请务必将其混合均匀。

问题3)该产品可以用来制作3D胶原蛋白凝胶吗?

回答3)本产品不适用于制作3-D(厚)凝胶,因为该溶液不会胶凝(可能是由于生产过程中粉末被γ-照射过)。我们建议使用大鼠尾胶原蛋白(货号:C7661)或超纯牛胶原蛋白(货号:C4243)。  

问题4)胶原蛋白包被好的培养皿可以存放多长时间?

回答4)关于包被好的培养皿的存储,我们不作任何建议。由于湿度等多个因素可能会影响包被好的培养皿的保存时间,因此客户应自行确定是否可以存储培养皿以及在何种条件下存储。我们供应Sigma Screen胶原蛋白包被培养皿(货号:S3315),产品说明如下:为获得最佳性能,请将未开封的产品存放于2-8°C干燥处。产品在室温下可保存长达三个月。不得将产品暴露在50°C以上的高温。


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