支原体检测和消除

来源:Edward Burnett and Liz Penn, European Collection of Cell Culture (ECACC®)
Don Finley, Market Segment Manager, Sigma® Life Science
Biofiles, Vol. 8, No. 18

支原体污染是细胞培养者主要头疼的问题。支原体是小而简单的细菌,缺乏细胞壁,代表细胞系污染最普遍也是最常见的来源。支原体污染是不可见的,即使在高达108个细胞/mL的密度下,浊度或pH也不会发生明显改变。支原体感染可能是非常致命的。事实上,细胞培养研究中支原体感染的最常见的来源是另一种已被感染的培养物被带入了实验室。而另一个主要来源则是实验室工作人员,因为人型支原体一直是细胞培养中支原体感染的主要来源。支原体可以引起细胞培养物的变化,包括生长速率改变、形态变化、染色体畸变和细胞代谢改变,因而是一个问题。事实上,一个支原体污染的细胞系,由于其特征的改变,可以被认为是一个不同的细胞系。

为了最好的防止支原体污染,需要始终遵守良好的细胞培养实践规范,包括:除进行原代培养外均使用无抗生素培养基;严格隔离所有进入的细胞系直到检测确认不含支原体。对于所有进行细胞培养的实验室,无论是内部的还是外包的,均建议定期检测支原体污染。有很多的支原体检测方法可供选择,每种方法都有自己的优点和缺点。在HPA培养系列中,综合使用三种方法(培养测试、DNA染色(Hoechst 33258)和PCR),以确保不在体外生长的支原体菌株可以被DNA染色和PCR检出。培养测试的灵敏度最高(它包括一个扩增步骤),尽管它要求生物体必须是活的,但它可以检出几乎所有物种,因此应该被用于所有的种源细胞库。然而,它需要一个月才能得到结果,所需的培养基很复杂而货架期相对较短,且必须包括活体阳性对照。Hoechst染色是一种普通的DNA染色方法,并非支原体特异性的,它还可以检出细胞色素吸附污染。因而对结果的解读会存在问题。这两种方法都是FDA和EP认证的。PCR提供了一种快速(一天内可知结果)、相对较高的检出率的支原体检测方法,这在疑似支原体污染爆发的情况下是很宝贵的。它既具有成本效益,且需要的培训很少。

在生物医学领域,使用经过鉴定不含支原体污染的细胞系是产生稳健、可靠和可再现的数据的先决条件。Sigma深知维持真正的无污染的细胞系是一项挑战,而如果失败将是毁灭性的。Sigma提供的全系列的支原体检测和消除试剂盒使得支原体控制的冗长繁琐的过程变得更加高效和更少担忧。另外,来自Sigma的经鉴定无污染的ECACC细胞系为基于细胞的关键性的生物医学研究提供了良好的开端。

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