一期药物代谢

作者:Robert GatesBiofiles Volume 6 Article 1

一期生物转化反应在药物上引入或暴露官能团,目的是增加化合物的极性。尽管一期药物代谢发生在大多数组织中,但代谢的主要和首过关卡位点发生在肝循环期间。其他的代谢发生在胃肠上皮、肾、皮肤和肺组织。在细胞内,大多数一期酶位于内质网中,因此在微粒体制剂中含量高。

一期反应大致分为三类:氧化、还原和水解。由于大多数小分子药物本质上是亲脂性的,药物代谢将这些疏水性化合物转化为可以排泄掉的更加水溶性的化合物。通常,氧化是最常见的一期反应。肝细胞色素P450系统是一期氧化系统中最重要的系统(图1)。

我们的肝微粒体细胞色素P450酶是在活性位点附近含有硫醇盐血红素的膜结合氧酶。

图1. 我们的肝微粒体细胞色素P450酶是在活性位点附近含有硫醇盐血红素的膜结合氧酶。氧化机制的电子供给由偶联的NAD(P)H还原酶和细胞色素b5系统提供。直到最近,从人体组织中分离和重构天然酶的困难,阻碍了它们用于具有明确定义的体外药物代谢系统的研究。因此,多酶微粒体制剂通常用于阐明药物和其他异生素的氧化物命运。我们的重组微粒体制剂具有单细胞色素P450同工酶活性的优点。

 

 细胞色素P450酶

细胞色素P450是单加氧酶超级家族的成员,其催化异生素的氧化代谢(这是生物转化的第一步)和消除多种药物和环境污染物。P450主要位于肝组织的内质网中。

 

 细胞色素P450酶

Cerosomes:在酵母中表达的P450微粒体

使用真核酵母宿主允许活性同工酶的有效表达,具有更准确的翻译后修饰。在一些制剂中,从表达人细胞色素P450同工酶和人NADPH还原酶和细胞色素b5的酿酒酵母(Saccharomyces cervisiae)制备Cerosomes。

真核系统提供了具有以下优点的同工酶系统:

  • 重组同工酶模拟活性的天然人类酶
  • 更高的比活性和更好的信噪比(图2
  • 一致且可再现的结果
. 与细胞色素P450孵育后

图2. 与细胞色素P450孵育后,由酶特异性非荧光底物产生的荧光产物测定的比活性。荧光发射与时间的关系产生每mg蛋白的活性。

Cerosomes细胞色素P450同工酶是以含有50mM磷酸钾(pH7.4)、5%甘油、1mM EDTA和1mM PMSF的溶液提供。

 

 细胞色素还原酶和细胞色素b5

细胞色素P450系统的氧化机制需要蛋白质的电子传递系统来支持催化作用。细胞色素P450(NADP)还原酶与我们所有的重组细胞色素P450制剂共表达。细胞色素b5也与一些制剂共表达。

细胞色素P450还原酶催化血红素依赖性单加氧酶如EC 1.14.14.1(未指定的异生素单加氧酶2)的还原,并且是微粒体羟化系统的一部分。该还原酶是含有FMN和FAD的黄素蛋白。它还可以减少细胞色素b5和细胞色素c。

细胞色素b5是15kDa的膜结合黄素蛋白,能够增强P450氧化系统的氧化还原电位。

 

 选择的细胞色素P450底物

 

名称

描述

货号

硫酸异喹胍

其代谢产物可能诱发帕金森病。

D1306-100MG

3-氧代-1-环戊烷羧酸

是用细胞色素P450 BM-3突变体进行生物羟化研究中所使用的底物。

550485-1G
550485-5G

Resorufin苄基醚

-

B1532-5MG
B1532-10MG

Resorufin乙醚

-

E3763-1MG
E3763-5MG

Resorufin甲基醚

是细胞色素P450连接酶的荧光测定底物。

M1544-1MG
M1544-5MG

Resorufin戊醚

是细胞色素P450连接酶CYP2B和CYP2B4的荧光测定底物。

P0928-1MG
P0928-5MG
P0928-10MG

 

 选择的一期酶抗体

 

品名

宿主

克隆编号

形式

基因符号

品种反应性

应用

Prestige抗体

货号

单克隆抗-AKAP9

小鼠

1A6

纯化免疫球蛋白

AKAP9,人

ELISA (i) WB

-

WH0010142M1-50UG

抗-AKAP9/AKAP450/ CG-NAP

山羊

-

亲和分离的抗体

AKAP9,人

人、小鼠

ELISA (i) IHC WB

-

SAB2500052-100UG

抗芳香酶

-

亲和分离的抗体

CYP19A1,人

IF (i) WB

-

A7981-25UL
A7981-200UL

抗芳香酶/CYP19A1

山羊

-

亲和分离的抗体

CYP19A1,人

ELISA (i) WB

-

SAB2500110-100UG

抗-CYP11A1

-

亲和分离的抗体

CYP11A1,人

IHC (p) PA

HPA016436-100UL

抗-CYP17A1

山羊

-

亲和分离的抗体

CYP17A1,人

犬、猫、人

ELISA (i) WB

-

SAB2500285-100UG

抗-CYP1A1 (AB2)

-

亲和分离的抗体

CYP1A1,人

WB

-

AV41404-50UG

抗-CYP1A1 (AB3)

-

亲和分离的抗体

CYP1A1,人

WB

-

AV41405-50UG

抗-CYP1B1

-

亲和分离的抗体

CYP1B1,人

WB

-

AV51761-50UG

单克隆抗-CYP1B1

小鼠

2F8

纯化免疫球蛋白

CYP1B1,人

ELISA (i)

-

WH0001545M3-100UG

抗-CYP24A1

-

亲和分离的抗体

CYP24A1,人

IHC (p) PA

HPA022261-100UL

单克隆抗-CYP24A1

小鼠

1F8

纯化免疫球蛋白

CYP24A1,人

ELISA (i) WB

-

WH0001591M7-100UG

抗-CYP26A1 (481-495)

-

抗血清的IgG部分

CYP26A1,人

WB

-

C6498-200UL

抗-CYP26B1

-

亲和分离的抗体

CYP26B1,人

IHC (p) PA WB

HPA012567-100UL

抗-CYP2C19

-

亲和分离的抗体

CYP2C19,人

IHC (p) PA WB

HPA015066-100UL

抗-CYP2C8

-

亲和分离的抗体

CYP2C8,人

IHC (p) PA WB

HPA013547-100UL

抗-CYP2D6

-

抗血清的IgG部分

CYP2D6,人

IHC WB

-

AV41675-100UG

抗-CYP2E1

-

亲和分离的抗体

CYP2E1,人

IHC (p) PA WB

-

HPA009128-100UL

抗-CYP2E1

-

亲和分离的抗体

CYP2E1,人

WB

-

AV41424-50UG

单克降抗-CYP2J2

小鼠

2D10

纯化免疫球蛋白

CYP2J2,人

ELISA (i) WB

-

WH0001573M1-100UG

抗-CYP3A4

小鼠

-

抗血清的IgG部分

CYP3A4,人

ELISA (c) IHC (p) WB

-

SAB1400064-50UG

抗-CYP3A4

-

抗血清的IgG部分

CYP3A4,人

ELISA (c) WB

-

SAB1400065-100UG

抗-CYP4F2

-

亲和分离的抗体

CYP4F2,人

IHC (p) PA

HPA014048-100UL

抗-CYP51A1 (495-509)

-

抗血清的IgG部分

CYP51A1,人

WB

-

C8873-200UL

抗-CYP7A1

-

亲和分离的抗体

CYP7A1,人

IHC (p) PA WB

HPA010970-100UL

抗-CYP7B1

-

亲和分离的抗体

CYP7B1,人

IHC (p) PA WB

HPA017761-100UL

单克隆抗细胞色素P450 1A2

小鼠

3B8C1

纯化免疫球蛋白

CYP1A2,人 Cyp1a2,大鼠

人,大鼠

IHC WB

-

C5118-25UL
C5118-200UL

单克降抗细胞色素P450 2C6 (CYP2C6)

小鼠

K1

纯化免疫球蛋白

Cyp2c6, rat

人,大鼠

ELISA (i) WB

-

C0746-25UL
C0746-200UL

单克降抗细胞色素P450 3A5

小鼠

F18 P3 B6

纯化免疫球蛋白

CYP3A5,人

ELISA (i) IHC WB

-

C4743-25UL
C4743-200UL

抗-DBH

-

亲和分离的抗体

DBH,人

IHC (p) PA

HPA005960-100UL

抗-FMO1

-

亲和分离的抗体

FMO1,人

IHC (p) PA

HPA023680-100UL

抗-FMO3

-

亲和分离的抗体

FMO3,人

IHC (p) PA WB

HPA013750-100UL

抗-KMO

-

亲和分离的抗体

KMO,人

IHC (p) PA

HPA031115-100UL

抗-PAM

-

亲和分离的抗体

PAM,人

WB

-

SAB2101711-50UG

抗-POR

-

亲和分离的抗体

POR,人

IHC (p) PA WB

HPA010136-100UL

抗-TPH1

-

亲和分离的抗体

TPH1,人

IHC (p) PA WB

HPA022483-100UL

抗-YWHAZ

-

抗血清的IgG部分

YWHAZ,人

WB

-

AV48046-100UG

 

 材料