使用以硫酸铵悬浮液形式提供的酶 - 技术说明

- 如果硫酸铵可能会干扰反应:

1.      从冰箱中取出酶。注意:我们强烈建议不要冷冻硫酸铵悬浮液。

2.      确保盖子已拧紧,然后将小管/瓶子翻转几次,以获得乳状悬浮液。该过程可能耗时一分钟左右。不要进行涡旋震荡或超声处理,否者处理强度过高可能会使一些酶变性。

3.      使用移液枪和无菌大口径移液枪吸头,取出一部分悬浮液。

4.      将悬浮液转移至干净的微量离心管中(如果操作规模较大,则转移至普通离心管中)。

5.      经过约10,000-15,000xg离心10分钟使酶沉淀。如果条件允许,请使用可控制温度在2°C至8°C之间的冷冻微量离心机。

6.      小心移出尽可能多的上清液,并保留。该过程不必一定要移出所有的硫酸铵溶液。

7.      加入适量的反应缓冲液溶解沉淀。

8.      测定上清液和来自沉淀的溶液中的蛋白含量和/或酶活性。

- 如果硫酸铵不会干扰反应:

1.      同上面的步骤1-3。

2.      将悬浮液直接加入反应缓冲液中。

注意,在硫酸铵悬浮液中,大多数酶将是以固体形式存在的,因此可能只有几乎可忽略的酶存在于硫酸铵溶液中。

 

材料