用于细胞和组织培养的血清:常见问题解答(FAQ)

血清产品的相关生物学、质量和法规信息

 

为什么细胞和组织培养需要血清?

以2-10%浓度添加血清作为培养基补充物,以提供营养、激素、生长和粘附因子的混合物。血清还可作为细胞培养系统的缓冲剂,可抵抗细胞生长过程中的各种破坏和毒性作用,如pH变化、蛋白水解活性或者存在重金属或内毒素。

 

如何处理血清?

冷冻运输至处理设备后,将血清解冻,然后检测是否存在细菌、病毒、内毒素以及血红蛋白含量。然后在无菌条件下用一系列膜过滤器对质量最优的血清进行过滤,最后过0.1微米孔过滤器。过滤后,在无菌条件下,将血清分装到无菌瓶中,快速冷冻至-20℃并隔离,直至所有批次均达到或超过质量控制标准。可根据要求提供每一批次的分析证书。


血清的推荐储存温度是多少?

血清的推荐储存温度是-5℃至-20℃,因为它在使用前冷冻保存最稳定。建议不要在无霜冰箱中存放血清,否则温度循环可能会造成瓶子破裂,从而导致产品污染或变质。


如何解冻血清?

将血清在2-8℃下解冻过夜,可防止降解;也可以室温解冻,定期搅拌以重悬内容物。解冻的血清应在加入细胞培养基之前充分混合。

反复冻融会显著影响血清质量,建议将解冻的血清以单次使用量进行分装,-20℃储存。如果血清储存在2-8℃,应在2-4周内使用。

注:温度高于37°C可能会使营养成分降解、血清性能降低。


如果血清送到时部分解冻,我还可以使用吗?

血清是以干冰包装,应冷冻送抵。但是,如果血清因延迟而部分解冻,仍可使用。将血清完全解冻,以单次使用量分装后进行储存和进一步使用。


血清产品的保质期是多久?

血清的保质期为自生产之日起五年。


血清对光敏感吗?

在典型的室内/实验室照明下正常处理血清几乎没有影响。但是,血清确实含有某些对光敏感的成分。因此,不建议将血清暴露于强度高或波长短的光。


血清为什么会混浊?

血清出现沉淀有多种原因:

  • 反复冻融会使血清脂蛋白变性而引起混浊。以单次使用量进行分装可减少这种情况的发生。
  • 低温快速处理血清可保持生长特性,这可能会在血清中留下一些纤维蛋白原,其在解冻时可转化为纤维蛋白。血清中过量的纤维蛋白呈絮状物存在,其可通过400xg离心除去。不推荐过滤血清去除絮状物,否则过滤器可能会堵塞,或者可能会在过滤器上无意中滞留所需的蛋白。


添加血清和所有补充物后培养基可以保存多久?

如果仔细进行了无菌处理,补充血清的培养基可在2-8℃下储存长达六周。培养基混浊后,无论存放时间长短,都应使用适当的机构生物安全方案丢弃培养基。


牛血清产品检测是否包括内毒素、细菌、真菌、霉菌、支原体和噬菌体检测?

我们对所有血清产品和FBS都进行了相关微生物污染物检测。可根据要求提供每一批次的分析证书(CoA, CofA)。


血清产品是否携带牛海绵状脑病(BSE)?

不携带。所有Sigma-Aldrich血清均来自无BSE风险或低风险的国家。政府间世界动物卫生组织(OIE)通过监控国家对OIE指南和标准的遵守情况,在全球范围抵制动物疾病。


什么是γ-辐照(胎牛)血清?

γ-辐照是将血清暴露于25-35 kGy剂量的钴-60源,使病毒和其他外来微生物菌剂(如支原体)失活。γ辐照不会降低血清的理化特性或细胞培养性能。


为什么(以及如何)热灭活血清?

自然存在于哺乳动物血清中的补体蛋白可介导细胞溶解,收缩平滑肌,并激活淋巴细胞和骨髓细胞。热灭活可破坏血清中补体的活性。因此,推荐将该方法用于免疫应用和胚胎干细胞(ESC)、昆虫细胞和平滑肌细胞的培养。

热灭活过程必须小心控制,防止所需血清蛋白变性,所述血清蛋白质是细胞和组织增殖所必需的关键血清成分。

将血清加热至56℃,持续30分钟,即可热灭活。


为什么血清存在批次差异?

血清是从生物源提取的溶液,其成分可能因批次而异。为了最大限度地减少应用变异性,我们对每个批次进行严格的质量检测,而且可为客户提供批样,以便在实验室检测。我们会保留客户批次鉴定过程中测试批次的材料。


FBS的颜色与之前的批次不一样。这会影响血清性能吗?

血清的颜色取决于血红蛋白浓度,该参数的差异不会影响血清性能。


为什么血清的
产地很重要?

血清的原产地(有时也称为“来源”)是采集未精制血液的国家。不要与血清分离、过滤或以其他方式处理的国家混淆,这两者可能并不相同。血清供应商的原产地证书应明确说明血清的来源和处理信息。

 

USDA原产血清和美国原产血清之间有什么区别?

 

美国原产血清 USDA原产血清
美国原产血清采自美国境内的设备,这些设备由美国农业部(USDA)连续检查。 USDA原产血清采自美国境外的设备,这些设备已被USDA批准进口到美国。
其中包括澳大利亚、加拿大、新西兰、智利和中美洲。



可追溯性和产地如何影响血清成本?

虽然“产地”是指采集血清的国家,但“可追溯性”一词是指从原产追踪血清的生产和分销的文件。

血清是一种商品,其价格因原产国而异。例如,由于供应量较少和/或采集相关成本较高,原产自澳大利亚和新西兰的血清成本可能高于其他国家。