Duolink® PLA应用

Duolink® PLA技术可采用与传统IF或IHC实验同样简单的免疫检测方案对蛋白质互作、翻译后修饰和低表达蛋白进行检测、定量和成像,但却能获得更灵敏的信号。查看下列不同应用,了解关于多功能性Duolink® PLA产品的更多信息。

 

蛋白质互作

翻译后修饰

低丰度蛋白

蛋白质定位 

数字定量

 

蛋白质互作

蛋白质互作形成的复合体在许多重要的生物学过程中起着决定性的作用,例如DNA复制、转录、翻译、剪接、分泌、细胞周期控制、信号转导和中间代谢等。蛋白质自身的作用和活性通常会由于与其他蛋白质的互作而改变。了解疾病通路是研究蛋白质如何与细胞的各种成分发生互作的根本出发点。无论蛋白质互作是瞬时的还是稳定的,测量这种变化都是至关重要的。通过Duolink®技术,您能够目睹稳定、微弱和瞬时的内源性蛋白质互作。

想要了解您的蛋白质与哪些成分发生互作,请查看 STRING数据库。

翻译后修饰

蛋白质的互作通常取决于一种或两种蛋白质的修饰状态。翻译后修饰(PTM)是指蛋白质在核糖体翻译完成后的蛋白质合成过程中经历的共价加工过程,一般为酶促修饰。影响功能和结构蛋白质组学研究的几种PTM包括—磷酸化、糖基化、酰化、硫酸化和泛素化。传统的PTM分析需要凝胶电泳、质谱高效液相色谱和免疫化学等多种技术共同完成。

如今,Duolink® 使您能够观察到固定细胞和组织中的内源性修饰事件。

点击此处,了解关于翻译后修饰的更多信息。

低丰度蛋白

研究天然形式的蛋白质对于真实的疾病生物学研究至关重要。但是,指定样品中的蛋白质浓度可能具有广泛的动态范围。过去,研究天然形式的蛋白质需要将目标蛋白过表达、标记或基因修饰。如今,通过Duolink,您能够检测单个蛋白质或蛋白质互作的内源性蛋白质水平。

蛋白质定位

蛋白质定位需要对蛋白质在细胞中的位置进行计算预测。了解蛋白质在亚细胞水平上的定位,有助于更好地了解蛋白质的功能、互作过程和细胞信号通路。传统的内源性蛋白定位研究技术常常发生脱靶结合以及与其他蛋白质的交叉反应。如今,Duolink®的二抗系统可提高对目标蛋白的特异性和灵敏性。

 

 

数字定量

对细胞和组织图像均可进行分析。大多数显微镜软件和其他免费软件(如BlobFinder、Image J、Cell Profiler等)均可用来分析PLA数据。通过细胞核自动检测和细胞质尺寸估计等功能(如可用),可对组织或细胞群体的表达水平进行单细胞统计分析。


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流式细胞术

流式细胞术是一种出色的细胞群分析方法。Duolink® flowPLA检测试剂盒具有灵敏的蛋白质、蛋白质互作和蛋白质修饰检测功能,可实现更出色的细胞群分析。Duolink® flowPLA实验需要固定的悬浮细胞、两种可分别识别目标蛋白的一抗、一对PLA探针(一个PLUS和一个MINUS)、清洗液以及Duolink® flowPLA检测试剂盒。flowPLA试剂盒具有4种不同荧光染料:Red、Green、Orange或FarRed。

 

在Duolink® PLA过程中延长扩增时间有助于流式细胞术对低丰度蛋白靶点的检测。利用 Duolink® PLA检测由EZH2介导的组蛋白3(H3K27me3)第27位赖氨酸的三甲基化。 A) 扩增100分钟后,通过荧光显微镜观察到DU145细胞核(蓝色)中有少量PLA信号(红色)。使用FITC- Phalloidin染色的肌动蛋白(绿色)作为对照。B) 延长扩增时间改善了传统流式细胞术对EZH2-H3K27me3互作等低丰度蛋白事件的检测。C) 将Duolink® PLA与成像流式细胞术结合,可对大型细胞群体中的蛋白质或蛋白质事件(互作或修饰)进行定位。

 

材料

 

货号 描述 加入购物车
起始试剂盒
DUO92101 Duolink® In Situ Red Starter 试剂盒小鼠/兔
DUO92102 Duolink® In Situ Orange Starter 试剂盒小鼠/兔
DUO92103 Duolink® In Situ Red Starter 试剂盒小鼠/山羊
DUO92104 Duolink® In Situ Orange Starter 试剂盒小鼠/山羊
DUO92105 Duolink® In Situ Red Starter 试剂盒山羊/兔
DUO92106 Duolink® In Situ Orange Starter 试剂盒山羊/兔
Duolink® PLA 辅料
DUO80102 Duolink® In Situ 明场封固液
DUO82040 Duolink® In Situ 封固液,含DAPI
DUO82047 Duolink® In Situ 洗涤液,明场
DUO82049 Duolink® In Situ 洗涤液,荧光
DUO82064 Duolink® In Situ 微孔板细胞核染色剂,抗淬灭
DUO82065 Duolink® In Situ 微孔板热传导模块
DUO90806 Duolink® 成像工具
Duolink® PLA 检测试剂
DUO92007 Duolink® In Situ Orange 检测试剂
DUO92008 Duolink® In Situ Red 检测试剂
DUO92012 Duolink® In Situ 明场检测试剂盒
DUO92013 Duolink® In Situ 远红外检测试剂
DUO92014 Duolink® In Situ Green检测试剂
Duolink® PLA 探针
DUO92001 Duolink® In Situ PLA®探针抗小鼠PLUS亲和纯化的驴抗小鼠IgG (H+L)
DUO92002 Duolink® In Situ PLA®探针抗兔PLUS亲和纯化的驴抗兔IgG (H+L)
DUO92003 Duolink® In Situ PLA®探针抗山羊PLUS亲和纯化的驴抗山羊IgG (H+L)
DUO92004 Duolink® In Situ PLA®探针抗小鼠MINUS亲和纯化的驴抗小鼠IgG (H+L)
DUO92005 Duolink® In Situ PLA®探针抗兔MINUS亲和纯化的驴抗兔IgG (H+L)
DUO92006 Duolink® In Situ PLA®探针抗山羊MINUS亲和纯化的驴抗山羊IgG (H+L)
DUO92009 Duolink® In Situ Probemaker PLUS
DUO92010 Duolink® In Situ Probemaker MINUS
DUO92020 Duolink® In Situ PLA® Probe Anti-Human PLUS
DUO92021 Duolink® In Situ PLA® Probe Anti-Human MINUS

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 参考文献

  1. Phizicky E. M. and Fields S. (1995) Protein-protein interactions: Methods for detection and analysis. Microbiol Rev. 59, 94-123.
  2. Stadler, Charlotte, et al. (2012) Immunofluorescence and fluorescent-protein tagging show high correlation for protein localization in mammalian cells. Nature. doi:10.1038/nmeth.2377