EX-CELL® Advanced™ CHO补料分批培养基

化学成分明确、无动物源性成分的CHO细胞培养基

不含L-谷氨酰胺,不含次黄嘌呤,不含胸苷

液体 货号 14366C
粉末 货号 24366C

 

描述

EX-CELL® Advanced™ CHO补料分批培养基是一种化学成分明确的二代培养系统。该配方通过对10,000多个数据点进行多元分析开发而成,这些数据点覆盖性能、物理、法规和安全设计规范等各个方面。该培养基可与Advanced™ CHO Feed 1合用,非常适合作为所有工业CHO细胞系(CHO-S、 DuxB11、DG44、CHO-M和CHOZN GS)的补料分批培养平台。

 

预期用途

适用于生物制造业的进一步生产,不得用于人类或兽医行业的体外诊断。

 

产品处理和储存

不得使用混浊或含沉淀物的液体培养基。粉末产品应在2-8°C的干燥环境中避光保存长达2年,而液体产品则应在2-8°C环境中避光保存长达1年。务必使用无菌技术处理或补充该培养基。请阅读安全数据表(SDS)并遵守相关操作说明。请穿戴合适的护目镜、防护服和手套。

 

使用方法

制备说明

EX-CELL® Advanced™ CHO补料分批培养基不含L-谷氨酰胺和次黄嘌呤/胸苷。无菌补充说明:

1.在用于无需GS筛选的应用前,加入L-谷氨酰胺(货号59202C),终浓度为2–8 mM。

2.在用于无需DHFR筛选的应用前,加入HT培养基添加剂(货号H0137)。

注:添加剂的性质可能会影响产品保质期。

 

初始培养

  1. 将一管冷冻细胞置于37°C水浴中快速解冻(<1分钟)。
  2. 将全部细胞无菌转移至含30 mL预热的完全EX-CELL®AdvancedTM CHO补料分批培养基的125-mL培养瓶中。
  3. 在潮湿的37°C、5% CO2 孵育器中,将孵育器置于轨道摇床(19mm直径轨道)上以120–140 rpm的速度摇动孵育。
  4. 在复苏后的前两次传代时,维持细胞密度在0.5–1 ×106个活细胞/mL之间;之后,可恢复至正常的维持方案。

 

传代培养

  1. 确认孵育器条件设置为37C、5% CO2,并且有水控制湿度(~80%)。
  2. 将完全EX-CELL®AdvancedTM CHO补料分批培养基预热至室温。
  3. 在无菌环境下,从培养瓶中取出少量细胞培养样品,并使用血球计或自动细胞计数器通过台盼蓝排除法计数。如果细胞存活率低于90%,请勿继续下一步。注:如果细胞存活率低于90%,应在继续之前先排除问题。
  4. 确定接种至新培养瓶的正确细胞培养物体积。在每个125-mL培养瓶中含30 mL新鲜EX-CELL® Advanced™ CHO补料分批培养基的条件下,使起始细胞密度为2-3 x105 个细胞/ml。
  5. 将合适体积的细胞无菌转移至新培养瓶,并加入所需体积的预热培养基。
  6. 在潮湿的37°C、5% CO2孵育器中,将培养瓶置于轨道摇床(19mm直径轨道)上以120–140 rpm的速度摇动孵育。
  7. 每周按上述步骤传代至少2次,可根据需要放大培养量。注:在传代时,遗留的培养基不应超过最终体积的25%。如果遗留量超过25%,建议离心。

 

冷冻保存

  1. 准备所需数量的细胞,在细胞生长的对数中期收集存活率高于90%的细胞。
  2. 制备冻存培养基,其组成为46.5%冷藏的EX-CELL® Advanced™ CHO补料分批培养基、46.5%条件培养基和7%二甲亚砜(DMSO)。
  3. 将细胞以200g的速度离心5分钟,去除上清液,收集细胞。
  4. 将细胞沉淀重悬于冷冻培养基中,密度为5 x106至1 x107 个细胞/mL。
  5. 将1-2mL细胞混悬液快速转移至无菌冻存管中。
  6. 根据标准操作流程,将冻存管置于控速冷冻装置中(每分钟降低1°C)。
  7. 对于长期保存,应将冻存管转移至液氮(汽相)中。

订购方法

如需详情,请联系您的区域代表或致电客服部门。

 

材料