转染试剂


 转染简介

 


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 概述

转染涉及将DNA或RNA引入真核细胞,用于研究和调节基因表达。因此,转染技术作为分析工具,有助于表征遗传功能、蛋白质合成、细胞生长和发育。转染测定不仅可以促进细胞研究的进步,还可以加强药物研发策略。


 转染的类型

有多种转染方法,包括物理、化学和生物技术。这些技术通常涉及使用瞬时或稳定转染方法将核酸掺入细胞中。

瞬时转染技术涉及将DNA引入细胞,但在该方法中,DNA不与细胞染色体整合。该技术具有较高的转染效率,并且可在1-4天后分析基因转录。对于哺乳动物细胞培养物的大规模瞬时基因表达(TGE),可以使用转染载体,例如聚乙烯亚胺(PEI)和磷酸钙(CaPi)。此外,还开发了在没有血清的情况下使用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的大规模TGE方法1

稳定转染技术涉及将转染的DNA整合到细胞染色体中或形成附加体。随后可以使用可选择标记鉴定稳定转染的细胞,这些标记包括二氢叶酸还原酶(DHFR)、潮霉素B磷酸转移酶(HPH)和腺苷脱氨酶(ADA)等。

一些常用的转染技术包括磷酸钙沉淀、脂质转染、电穿孔和病毒输送。另外,这些方法可用于共转染。这些技术涉及将两种不同的核酸同时输送到同一细胞中,并且通常用于实现稳定转染。转染方法已经发展出许多新方法,例如使用高速微粒输送细胞核酸的Biolistic输送系统,以及促进siRNA分子全身输送的体内转染方案。

 

转染的类型

 

磷酸钙转染

磷酸钙转染技术涉及DNA和磷酸钙的沉淀。通过将具有磷酸钠的HEPES缓冲盐水溶液与氯化钙溶液和DNA混合来促进沉淀2。甘油休克通常用来增强某些细胞中的DNA摄取。

虽然这种技术具有成本效益,可用于多种细胞的瞬时或稳定转染,但pH值相对较小的变化(±0.1)就会影响转化效率。此外,必须保持试剂均质以再现测定结果。然而,这种转染方法在RPMI或其他具有高磷酸盐浓度的培养基中不起作用。

脂质体介导的转染

脂质体介导的转染(脂质转染)技术涉及使用能够形成脂质体的阳离子脂质或者非脂质聚合物,例如DOTMA(N- [1-(2,3,-二油烯氧基)丙基] -N,N,N-三甲基铵氯化物)。这种脂质 / 聚合物形成脂质体,其与DNA结合并与细胞膜融合,从而实现DNA的细胞内转移3

用该技术可以比较容易地将核酸有效输送到细胞培养物中。经过相应修改,脂质转染也可以用于具有成本效益的高通量系统。然而,这种转染技术通常是细胞类型特异性的。

电穿孔转染

该技术涉及将细胞膜暴露于高强度电脉冲,这导致细胞的某些区域暂时失去稳定性。在这种瞬间失稳期间,细胞膜变得高度可渗透并允许各种外源分子进入,包括DNA4

电穿孔是一种简单的非化学技术,可以在各种细胞类型中产生高转化效率。尽管该技术不改变靶细胞形态和功能,但如果不在最佳条件下进行转染,该方法可导致细胞死亡。 

病毒转染

该方法涉及使用病毒载体将核酸输送到细胞中。病毒输送系统,例如慢病毒、腺病毒和肿瘤逆转录病毒载体,即使在难以转染的细胞中,也可用于转移核酸。

尽管病毒输送方法非常有效,但它们可能相当费力。此外,大多数病毒需要控制和仔细监测生物安全水平。在进行病毒转染之前,考虑几种限制因素也很重要,例如病毒载体的裂解性质、细胞系包装和宿主细胞特异性。


 选择转染试剂

随着转染实验方案的发展和转染测定的日益简化,为了达到最佳转染效率,选择合适的转染试剂十分必要。

在考虑合适的转染试剂时,重要的是鉴定测定的细胞类型和培养条件。稀有细胞培养物、神经元和原代细胞通常较难转染,因此需要能够促进转染的试剂,对这种难以转染的细胞更是如此。

此外,在选择合适的转染剂之前,还应考虑试剂水平和细胞毒性参数。 对于所需的细胞类型,理想的试剂应具有低细胞毒性和高转染效率。


我们提供完整系列的转染试剂,具有以下优势:

 

转染试剂 - 益处


根据技术、特性或应用的具体实验方案选择转染试剂:

 

产品编号和实验方案 名称 描述 特点及优点 添加到购物车
XTG9-RO

详细的实验方案
X-tremeGENE™ 9 DNA转染 非脂质体多成分试剂 • 在原代细胞和肿瘤细胞系中实现更高的转染效率。
• 使用具有低细胞毒性效应的试剂生成生理相关数据。
• 使用简单一致的实验方案提高实验吞吐量并实现靶评估。
XTGHP-RO

详细的实验方案
 
X-tremeGENE™ HP DNA转染试剂 非脂质体多成分试剂,不含动物源性成分。 • 在原代细胞和肿瘤细胞系中实现更高的转染效率。
• 使用具有低细胞毒性效应的试剂生成生理相关数据。
• 使用简单一致的实验方案提高实验吞吐量并实现靶评估。
SITRAN-RO X-tremeGENE™ siRNA转染试剂 脂质和其他成分的专利混合物,不含动物产品。 • 在许多不同细胞类型中能敲除基因表达超过90%。
• 使用单一试剂进行基于siRNA和基于共转染的基因敲除实验,最大限度地提高了实验灵活性。
• 细胞毒性低。
• 使用或不使用血清,避免了更换培养基。
NPT01

详细的实验方案
(PDF)
NeuroPorter™ 转染试剂盒 独特的专利阳离子脂质配方,被优化用于将DNA输送到原代神经元、神经胶质细胞和培养的神经元细胞系中,效率高,毒性低。

解决诸如细胞活力差、转染效率低、神经退行性变等问题。
• 针对原代神经元、神经胶质细胞和培养的神经细胞系进行了优化。
• 毒性极低,无神经退行性变或树突退缩。
• DNAl高效输送到原代神经元、神经胶质细胞和培养的神经细胞系。
• 使用起来迅速、容易。
• 同时适用血清和无血清两种转染实验方案
T0956

详细的实验方案
通用转染试剂 独特的可生物降解的专有阳离子聚合物配方,与阳离子脂质缀合。 • 快速、简便的实验方案。
• 适用于稳定和瞬时转染。
• 对于包括原代细胞在内的多种细胞类型效率高。
• 同时适用血清或无血清两种转染实验方案。
• 毒性低。
 
L3287 

详细的实验方案
(PDF)
Escort™ IV转染试剂 独特的专利聚阳离子脂质和中性非转染脂质配方。 • 适用于稳定和瞬时转染。
• 针对多种细胞系进行了优化。
• 毒性低。
• 同时适用血清和无血清两种转染实验方案。
• 特别适用于昆虫细胞。
L3037

详细的实验方案
(PDF)
Escort™ III转染试剂 独特的专利聚阳离子脂质和中性非转染脂质配方。 • 适用于稳定和瞬时转染。
• 针对多种原代细胞进行了优化。
• 毒性低。
• 同时适用血清和无血清两种转染实验方案。
• 特别适用于PC-12细胞。
CAPHOS

详细的实验方案
磷酸钙转染试剂盒 将DNA引入真核细胞的常用方法。 • 适用于瞬时和稳定转染。
• 对于多种细胞类型可再现。
• 被广泛引用。
• 价格低廉。
DOTAP DOTAP脂质体转染试剂 用于将DNA、RNA和其他带负电荷的分子转染到真核细胞中的阳离子脂质体形成化合物。 • 比磷酸钙和DEAE转染效率可高100倍。
• 毒性低于磷酸钙和DEAE转染。
• 同时适用血清和无血清两种转染实验方案。
• 适用体内转染实验方案。

按细胞类型或细胞系选择转染试剂。我们制定了用我们的试剂成功转染的细胞类型清单。实验方案有可能仍需要优化。可在这里访问完整清单。 


 实验方案概述

下面给出了磷酸钙转染和脂质转染技术的通用实验方案,可供用户比较。有关详细的操作步骤,请参阅产品具体的实验方案(上表中的链接)。


 参考文献

  1. Derouazi, M., Girard, P., Van Tilborgh, F., Iglesias, K., Muller, N., Bertschinger, M., & Wurm, F. M. (2004). Serum‐free large‐scale transient transfection of CHO cells. Biotechnology and Bioengineering, 87(4), 537-545.
  2. Conn, K. J., Degterev, A., Fontanilla, M. R., Rich, C. B., & Foster, J. A. (1998). Calcium phosphate transfection. DNA Transfer to Cultured Cells, 5, 111.
  3. Felgner, P. L., Gadek, T. R., Holm, M., Roman, R., Chan, H. W., Wenz, M., ... & Danielsen, M. (1987). Lipofection: a highly efficient, lipid-mediated DNA-transfection procedure. Proceedings of the National Academy of Sciences, 84(21), 7413-7417.
  4. Chang, D. C., Chassy, B. M., Saunders, J. A., & Sowers, A. E. (Eds.). (1992). Guide to electroporation and electrofusion. ISBN: 978-0-08-091727-6, Pages 1-5.
  5. Ausubel, F. et al (ed.) A Calcium Phosphate Transfection, Short Protocols in Molecular Biology, third edition, John Wiley & Sons, Inc., New York, p. 9.5-9.6, p. 9.39 (1995)