质粒DNA的共转染

Georg Hannig & Cordula Jany
Roche Diagnostics GmbH

 

简介

质粒的瞬时共转染是一种细胞蛋白互作研究、转录因子研究和shRNA编码质粒基因敲减研究的常用方法。因此,共转染有益于广泛的科学研究领域。本研究中使用了两种自发荧光报告基因增强型绿色荧光蛋白(eGFP)和红色荧光蛋白(mKate2)对X-tremeGENE HP和X-tremeGENE 9转染试剂(罗氏)的共转染效率进行了检测。

 

转染及自动成像

将HeLa细胞(ATCC)以每96孔1.2 x 105个细胞/100μl的密度接种。 细胞接种后24小时用PC3.1eGFP和pmKate2质粒(Evrogen)转染细胞。 对三种不同的pmKate2/PC3.1eGFP比率(每100μl复合物0.5 + 1.0、0.5 + 0.5、1.0 +0.5μg质粒)进行测定。此外,对四种不同用量的X-tremeGENE HP和X-tremeGENE 9转染试剂的复合物形成(每100μl复合物1,2,3或4μl试剂)也分别进行了检测。使用Cellavista分析仪和HOECHST 33342染色法,在转染后48小时对转染效率进行测定。

 

结果

  • 两种质粒的转染效率取决于质粒本身的不同比例以及总DNA/转染试剂的关系(见图1,A、B和E)。
  • X-tremeGENE HP和X-tremeGENE 9转染试剂均显示出了高共转效率(见图1,C和D)。
  • X-tremeGENE HP转染试剂在所有比例HeLa细胞中均显示出了更为一致的转染效率。

For life science research use only. Not for use in diagnostic procedures.

X-tremeGENE is a trademark of Roche. All other product names and trademarks are the property of their respective owners.

 

Successful co-expression of eGFP and mKate2

 

图1. eGFP和mKate2的成功共转染。仅用单独的PC3.1eGFP(A)和pmKate2(B)转染的HeLa细胞荧光图像,以及使用X-tremeGENE HP试剂共转染此两种质粒的荧光图像。 X-tremeGENE 9试剂(D)也显示了eGFP和mKate2的共表达。在图1E中,使用荧光细胞覆盖的面积与细胞覆盖的总面积的比率计算X-tremeGENE HP转染试剂的转染效率。图示质粒和试剂体积比率对应100 μl转染复合物。

 

 

Georg Hannig和Cordula Jany分别是来自罗氏诊断的研究科学家和市场经理。

赞助论文。BioTechniques 54:XXX (January 2013) doi 10.2144/000113979

 

材料