牛小肠碱性磷酸酶(CIP)

(CIP)
来自小牛小肠

(EC 3.1.3.1)
货号P4978

–20 °C储存

产品描述
产品概要
存储缓冲液
操作步骤:DNA去磷酸化

热灭活
材料
参考文献


 产品描述

CIP常用于脱去DNA、RNA及核糖和脱氧核糖核苷三磷酸上的5’-磷酸基团。5’-磷酸的去除对于防止酶切载体DNA的自身连接是非常有用的。该特性极大降低了克隆步骤中的背景(没有片段插入的质粒)。


 产品概要

活性:近10000单位/ml(见特定批次的活性标签)
DNA酶:未检出
切口酶:未检出
RNA酶:未检出
单位定义:一单位在37°C、pH 9.8条件下每分钟可水解1.0 µmol 4-硝基苯磷酸盐(二乙醇胺)。

10X CIP缓冲液(C 3225)
1 M NaCl
0.5 M Tris-HCl pH 7.9 at 25 °C
0.1 M MgCl2
0.01 M dithiothreitol


 存储缓冲液

10 mM Tris-HCl, pH 8.2
50 mM KCl
1 mM MgCl2
0.1 mM ZnCl2
50 % glycerol


 操作步骤:DNA去磷酸化

  1. 1X CIP缓冲液溶解DNA(0.5µg DNA/10µl)。
  2. 5’突出端DNA添加0.1单位/pmol CIP;3’突出端或平末端DNA添加1单位/pmol。
  3. 37°C孵育60分钟。
  4. 苯酚/氯仿2 (P3803P2069)提取或凝胶纯化DNA。*
  5. 酒精沉淀回收DNA。2
    *注:苯酚提取或凝胶纯化后无需再热灭活。


 热灭活

在5mM EDTA中75°C加热10分钟,可使95%以上活性灭活。


 材料

     


 参考文献

  1. Moessner,E. et al., Z. Physiol. Chem. 361, 543.
  2. Sambrook, J. et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1989), p 5.72, 6.22-6.47 and E.3-E.13

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