细胞培养基础:细胞培养中“该做”和“不该做”的事情

ECACC实验室手册第4版

以下是细胞培养中“该做”和“不该做”的事情。其中一些是强制性的,例如佩戴个人防护装备(PPE)。其中许多是常识,适用于所有实验室区域。然而,其中一些是组织培养特有的。遵循这些简单的规则,确保健康和可再现的细胞培养。

 

Cell Culture Best Practices

以下是细胞培养中“该做”和“不该做”的事情。其中一些是强制性的,例如佩戴个人防护装备(PPE)。其中许多是常识,适用于所有实验室区域。然而,其中一些是组织培养特有的。遵循这些简单的规则,确保健康和可再现的细胞培养。

细胞培养中该做的事情:细胞培养的最佳作业规范

  1. 始终佩戴个人防护装备(PPE)(实验室工作服/大褂、手套和护目镜)。此外,处理液氮时,应佩戴绝热手套、全面罩护目镜和防溅围裙。
  2. 使用一次性头套罩住头发。
  3. 佩戴组织培养设施专用PPE,并与普通实验室环境中佩戴的PPE分开保管。不同环境穿戴的大褂或实验室工作服用不同的颜色,以便区分。
  4. 保持所有工作表面整洁无杂物。
  5. 正确标记试剂,包括烧瓶培养基安瓿瓶,注明内容物和制备日期。
  6. 一次只处理一种细胞系。这种常识性做法可减少因错误标记等而造成交叉污染的可能性。这种做法还可以减少细菌和支原体的传播,这类传播是因为安全柜中许多打开的培养基容器和烧瓶会产生气溶胶。
  7. 在两个操作之间使用合适的消毒剂清洁工作表面,例如70%酒精。
  8. 培养中的不同细胞系的培养基容器要分开保管。
  9. 每天检查培养物和培养基,以便发现任何严重细菌或真菌污染的迹象。这包括商购培养基。
  10. 使用前,检查所有培养基和试剂的质量控制信息,最好测试其性能。
  11. 在所有细胞培养区域尽量清除包装纸箱。
  12. 确保定期清洁和维护培养箱、离心机和显微镜。
  13. 定期检测细胞是否存在支原体

细胞培养中不该做的事情:应避免的常见错误

  1. 请勿在培养基中连续使用抗生素,否则会导致出现抗生素耐药菌株,并可能掩盖潜在的污染。
  2. 请勿积累垃圾,特别是在微生物安全柜或培养箱内。
  3. 任何时候实验室中都不要有太多人。
  4. 请勿在主要的细胞培养区域处理来自未经验证来源的细胞。使用验证细胞的细胞供应商,例如ECACC,提供种子原液。在质量控制检查完成之前,应将它们隔离处理。
  5. 避免将细胞系继续保存在培养物中而不是放回冷冻原液中。
  6. 避免让细胞培养物完全汇合。始终在达到70-80%汇合度时进行传代培养,或者遵循ECACC细胞培养数据表的建议进行。
  7. 请勿使用过期的培养基。一旦添加谷氨酰胺血清,+4°C下的保质期仅为4-6周。
  8. 定期清洁以避免水浴变脏。
  9. 请勿让必要的设备失准。