细胞培养技术 — 细胞培养中“该做”和“不该做”的事情

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细胞培养的最佳作业规范
改编自

Cook Book 第12卷,细胞培养细胞培养实验室基础技术手册 - 第2版

目录

以下是细胞培养中“该做”和“不该做”的事情。其中一些是强制性的,例如佩戴个人防护装备(PPE)。其中许多是常识,适用于所有实验室区域。其中一些是细胞培养特有的。
 


 细胞培养的最佳作业规范

细胞系细胞培养基细胞培养试剂

  • 一次只处理一种细胞系。这种常识性做法可减少交叉污染的可能性。这种做法还可以减少细菌和支原体的传播,这类传播是因为安全柜中打开的培养基容器和烧瓶会产生气溶胶。
  • 定期检测细胞是否存在支原体
  • 每天检查培养物和培养基,以便发现任何严重细菌或真菌污染的迹象。这包括商购培养基。
  • 为培养中的每个细胞系单独保存各自的培养基容器。
  • 使用前检查所有培养基和试剂的质量。

实验室的作业规范

  • 确保定期清洁和维护培养箱、安全柜、离心机显微镜
  • 确保需要校准的设备定期校准,或者在怀疑其性能时校准。
  • 正确标记试剂,包括烧瓶、培养基和安瓿瓶,注明内容物和制备日期。
  • 始终佩戴个人防护装备(PPE)实验室工作服/大褂、手套护目镜)。此外,在处理液氮时,还应佩戴隔热手套全脸面罩防溅围裙
  • 佩戴组织培养设施专用PPE,并与普通实验室环境中佩戴的PPE分开保管。不同环境穿戴的大褂或实验室工作服用不同的颜色,以便区分。
  • 使用一次性头套遮盖头发。
  • 使用合适的消毒剂清洁工作表面,例如每个操作之间使用70%异丙醇,处理不同细胞系之间至少间隔15分钟。
  • 保持所有工作表面整洁无杂物。
  • 在所有细胞培养区域尽量清除包装纸箱。

 细胞培养中应避免的常见错误

细胞系细胞培养基细胞培养试剂

  • 请勿在主要的细胞培养区域处理来自未经验证来源的细胞。在质量控制检查完成之前,应将它们隔离处理。
  • 请勿在培养基中连续使用抗生素,否则会导致出现抗生素耐药菌株,并可能掩盖潜在的污染。
  • 避免将细胞系连续保存在培养物中而不放回冷冻原液中。
  • 避免让细胞培养物完全汇合。始终在达到70-80%汇合度时进行传代培养,或者遵循ECACC细胞培养数据表的建议进行。
  • 请勿使用过期的培养基。一旦添加谷氨酰胺血清,+4°C下的保质期仅为4-6周。

实验室的作业规范

  • 请勿让必要的设备失准。特别要确保定期测试微生物安全柜。
  • 请勿让水浴受到污染,应定期清洁。
  • 请勿积累垃圾,特别是在微生物安全柜或培养箱内。
  • 任何时候实验室中都不要有太多人。