Duolink®PLA产品选择指南

Duolink® PLA 入门试剂盒

Duolink PLA Starter KitDuolink®PLA上手十分简单。其操作方法与IF、IHC和流式细胞仪非常相似,但与这类传统的蛋白检测方法相比具有明显的优势。

Duolink® PLA基础试剂盒包含进行荧光Duolink®PLP实验所需的所有必要试剂,并可分析多达30份样品。您仅需要提供制备好的细胞或组织样本、一抗以及常用的实验室设备。

Duolink®PLA入门试剂盒包含:

  • 两个PLA探针:一个PLUS和一个MINUS探针(匹配一抗的宿主)
  • 抗体稀释剂和封闭缓冲液
  • 检测试剂:红色橙色可供选择 
  • 聚合酶
  • 连接缓冲液和连接酶
  • 洗涤液A和B
  • 含DAPI的封固剂

Duolink® PLA 探针

Duolink®PLA探针可单独购买。这些探针是与Duolink PLA PLUS或Duolink PLA MINUS寡核苷酸缀合的二抗。这些二抗为驴抗小鼠、抗兔或抗山羊多克隆抗体,对其他物种的交叉反应性低。

有六个选项可供选择:

Duolink PLA Probes

选择与您的一抗宿主种类相匹配的二抗。Duolink®PLA PLUS探针和Duolink®PLA MINUS探针都是实验成功所必需的。此外,每个Duolink®PLA探针试剂盒还配有封闭缓冲液和抗体稀释剂,这些试剂都已经过优化,可与Duolink®PLA试剂配合使用,从而最大限度地减少抗体和检测寡核苷酸的非特异性结合。

 

Duolink® 探针制备试剂盒

由于一抗的宿主种类非小鼠、兔或山羊,不能选择Duolink®PLA探针的实验,Duolink®探针制备试剂盒可以将PLA寡核苷酸 (PLUS or MINUS) 与任何抗体结合。 使用Duolink®探针制备试剂盒可以快速、简便的与抗体进行结合,且无需清理。欲获取更多信息,请查看实验方案以创建您自己的PLA®探针。 

 

Duolink® PLA 荧光检测

Duolink PLA Fluorescent detection reagents

Duolink®PLA荧光检测试剂包含四种不同的荧光团:绿色橙色红色远红色。每个试剂盒包含以下内容物:

  • 5x连接缓冲液 - 含有与PLA探针杂交的寡核苷酸和进行连接所需的组分
  • 连接酶
  • 5x扩增缓冲液 - 包含滚环扩增(RCA)所需的组分和与RCA产物杂交的荧光标记检测寡核苷酸
  • 聚合酶

Duolink®PLA检测试剂应根据所需的荧光颜色和可用滤光片进行选择。

 

荧光颜色 激发波长(nm) 发射波长(nm) 滤光片(或与之相同)
绿色 495 527 FITC
橙色 554 579 Cyanine 3
红色 594 624 Texas Red
远红色 644 669 Cyanine 5

 

Duolink® flowPLA 检测试剂盒 - 流式细胞仪

对于在流式细胞仪上的应用,Duolink®flowPLA检测试剂盒包含有四种不同的颜色:绿色、橙色、红色和深红色。

每个Duolink®flowPLA检测试剂盒包含:

  • 连接缓冲液(5x) - 稀释后制成1x连接缓冲液
  • 连接酶(1 U /μL) - 添加以制备连接溶液
  • 扩增缓冲液(5x) - 稀释后制成1x扩增缓冲液
  • 聚合酶(10 U /μL) - 添加以制作扩增溶液
  • 检测溶液(5x) - 稀释后制成1x检测溶液

检测需要额外的试剂,但须单独订购:

根据上表(在荧光检测下)选择您需要的颜色。 流式细胞仪实验方案 章节提供了有关实验操作的详细信息。

 

Duolink® PLA 明场检测

Duolink®PLA检测也可用于明场的应用。与IHC类似, Duolink®PLA明场检测试剂 含有用辣根过氧化物酶(HRP)标记的寡核苷酸,可在存在HRP底物的情况下形成光学显微镜可见的酶-底物沉淀。查看 明场实验方案 章节以获取更多详细信息。

每个Duolink®PLA明场检测试剂盒 包含两个包装盒,其分别包含:

  • 盒A(存储在-20°C)
    • 5x连接缓冲液 - 含有与PLA探针杂交的寡核苷酸和进行连接所需的组分
    • 连接酶
    • 5x扩增缓冲液 - 包含RCA所需的组分
    • 聚合酶
    • 5x检测缓冲液 - 含有与RCA产物杂交的HRP标记的检测寡核苷酸
  • 盒B(储存在4°C)
    • 过氧化氢
    • HRP底物溶液
    • 核染色液

检测需要额外的试剂,但须单独订购:

 

The Duolink® PLA 对照试剂盒

Duolink®PLA对照试剂盒 - PPI 应用EGFR和HER2之间明确的蛋白-蛋白互作来提供完全可靠的结果解读,从而实现更高效的工作流程。该试剂盒确定了最佳的一抗浓度,并提供了对相关实验条件的建议。

每个试剂盒包含:

  • 两个带有EGF处理的预固定SKOV3细胞的8孔室载玻片
  • 小鼠抗EGFR和兔抗HER2的一抗

 

Duolink® PLA 附件

其他Duolink®PLA试剂和附件均已经过优化,可与上面列出的Duolink®PLA试剂配合使用,包括:

 

产品选择

根据您的实验设计和应用形式来确定购买哪种Duolink®PLA的产品。所有Duolink®PLP实验都需要使用寡核苷酸缀合的抗体(一个PLUS和一个MINUS)。 如果您的一抗的宿主种类是小鼠、兔子或山羊,请使用Duolink®PLA探针,否则可以使用用于PLUS和MINUS的Duolink®探针制备试剂盒作为替代方案。注意:只要留有一个PLUS和一个MINUS探针,Duolink®探针制备试剂盒制造的探针就可与Duolink®PLA探头组合使用。

有关应用的特定要求,请查看以下实验步骤:


通过荧光显微镜检测

所需试剂:

  1. Duolink®PLA探针(一种PLUS和一种来自不同物种的MINUS,其需要与您的一抗的宿主种类相匹配)或Duolink®探针制备的PLUS和/或MINUS
  2. Duolink®荧光检测试剂(可选择绿色橙色红色远红色) 
  3. 用于荧光的洗涤液
  4. Dolink®含DAPI的固封液(用于载玻片) 核染色液和抗淬灭缓冲液(用于微孔板)

可选材料:

  1. 微孔板传热块


流式细胞仪检测

所需试剂:

  1. Duolink®PLA探针(一种PLUS和一种来自不同物种的MINUS,其需要与您的一抗的宿主种类相匹配)或Duolink®探针制备的PLUS和/或MINUS
  2. Duolink®flowPLA检测试剂盒(可选择 红色绿色橙色、 和 远红色
  3. 用于荧光的洗涤液

注意:FlowPLA检测试剂盒(DUO94001-DUO94004)提供足够的材料来完成指定数量的测试(40或100 TST),每个测试在100μL反应体积中有100,000个细胞。同时,还需要100rxn或250rxn尺寸的Duolink®PLA探针(一个PLUS和一个MINUS)(DUO92001-DUO92006)。

注意:Duolink®PLA试剂体积是基于显微镜载玻片上1 cm2样品的40 mL反应体积,或流式细胞仪检测中~1000 cells / mL的100 mL反应体积进行确定的。


通过明场显微镜检测

所需试剂:

  1. Duolink®PLA探针(一种PLUS和一种来自不同物种的MINUS,其需要与您的一抗的宿主种类相匹配)或Duolink®探针制备的PLUS和/或MINUS
  2. Duolink®明场检测试剂
  3. 用于明场的洗涤液
  4. 用于明场 IHC兼容的固封液

可选材料:

  1. 微孔板传热块
 

材料

 

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